课件：布病的实验室诊断.pptVIP

布鲁氏菌病血清学实验的生物安全 1 生物安全规定 BSL-1 2 实验的分类 灭活与否 3 使用的标本 血清 全血 血浆 脑脊液 4 血清中的布氏菌 未分离到 其它病原？ 5 血清中的核酸 难以测到 《人间传染的病原微生物名录》 ICDC, China CDC 布鲁氏菌病病原学实验生物安全 布氏菌在病原微生物的危害等级划分； 二类 属于高致病性 实验室适用等级分类：BSL-3 其中弱毒株或疫苗株可在BSL-2实验室操作 小量标本，初代分离等在BSL-2实验室操作 ICDC, China CDC 生物安全设备 生物安全柜 吸附垫：在操作台上放上贴有吸附材料的塑料薄膜，每日更换，可以把操作台的污染减少到最低程度。 柜内实验器材和材料的取出?：生物安全实验室的废弃的污染性材料、使用过的包装材料、容器、纸张等废弃物，都收装好或者经高压灭菌器灭菌后拿到缓冲区：实验中或完毕后，必须从安全柜中取出非灭活的病原体时，应装好放在消毒液槽中，使容器外侧被消毒后取出，消毒液种类因病原体不同而异。 生物安全设备 回收容器?：在安全柜内配置回收污染物质的容器：配置存放污染的玻璃器皿和废弃物容器。容器中必须配有消毒液，将污染物质完全浸没。这些回收容器至少每天操作完毕后盖好以防污染。再次使用时需重新配置消毒液。 瓶盖：安全柜内使用的瓶子不用橡胶塞，而用螺旋盖，开启时可减少气溶胶的发生。 消毒火焰：用火焰消毒是经典的微生物学操作方法，但是顾虑使柜内气流紊乱，尽量不使用。 良好的内务行为 应指定专人监督保持良好的内务行为。工作区应时刻保持整洁有序。禁止在工作场所存放可能导致阻碍和绊倒危险的大量物品。 所有用于处理污染性材料的设备和工作表面在每班工作结束、有任何漏出或发生了其他污染时应使用适当的试剂清洁和消毒。 对漏出的样本或培养物应在风险评估后清除并对涉及区域去污染。清除时应使用恰当有效的安全预防措施、安全方法和个人防护装备。 内务行为改变时应报告实验室负责人，以确保避免发生无意识的风险或危险。 实验室行为、工作习惯或材料改变可能对内务和/或维护人员有潜在危险时，应报告实验室负责人，并书面告知内务和维护人员的管理者。 应制定在发生事故或漏出导致生物、化学性污染时，设备保养或修理之前对设备去污染、净化和消毒的专用规程。 良好的内务行为 离开微生物实验室前，脱掉工作服后，应进行手的清洗。离开生物安全2级和3级实验室时，脱防护服后再次用肥皂及流水冲洗手。 消毒可使用0.3～0.5%碘伏消毒液或快速手消毒剂，如新洁尔灭醇、75%医用酒精或60%的异丙醇等3—5ml擦于手指、手掌、手背，揉搓1～3分钟。 良好的内务行为 谢谢大家! * * * * * * M DL2000 DNA Ladder1。B. melitensis 2. B. abortus 3. B. suis 4. B. ovis 5. B. neotomae 6.B. canis M 1 2 3 4 5 6 布鲁氏菌属BCSP31-PCR电泳结果 -----223bp AMOS-PCR 鉴定布氏菌种 布鲁氏菌DNA多态性一个原因就是插入序列分布，IS711就是一段插入序列，在数量和位置上都很保守，一个引物锚定在IS711上，其他不同的引物分别选在与插入基因IS711邻近的单染色体DNA上，代表种的特异性，通过扩增带的大小来鉴别种。设计5条引物的混合反应体系，适用于布鲁氏菌种间的鉴定方法，可鉴别布氏菌牛种1，2，4型、羊种布鲁氏菌、猪种1型和绵羊附睾种。除了共有的178bp以外牛种布鲁氏菌1，2，4型扩增条带为498bp，羊种布鲁氏菌扩增片段为731bp，猪种1型扩增条带为285bp，绵羊附睾种961bp。 19株标准菌株AMOS-PCR扩增结果 1000bp 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 2000bp 750bp 500bp 250bp 200bp 1、22.DL2000 DNA Ladder 2-4.B. Melitensis 1-3 5-11.B. Abortus 1 -7 12.B. Abortus 9 13-17.B. Suis .1 -5 18. B. ovis 19. B. neotomae 20. B. canis 21.阴性对照