高赖氨酸蛋白基因遗传转化水稻的研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

独创性声明本人声明，所呈交的学位(毕业)论文．是在指导教师的指导下， 独创性声明 本人声明，所呈交的学位(毕业)论文．是在指导教师的指导下， 通过我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了炙孛作 了标压和致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写 过的研究成果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明 确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承 担应有的责任。 学位(毕业)论文作者亲笔签名：祷孚簇 日期：，岁，莎，， 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林走学有关保留、使用学位(毕业)论文的规 定，即学校有权送交论文妁复印洚，丸许论文被查阏和借阕：雩援可以 公布论丈的全部或部分内容，可以采用影印，缩印或其他复制手段保存 论文。 保密，在年后解畜可适用本授权书， 口 不保密，本论文属于不保密。 口 学位(毕业)论文作者亲笔签名 爝孓磁 日瓤矿f．占．； 指导教师亲笔签名 日期：。j．6．{ 摘 摘 要 在稻米储藏蛋白质中，赖氨酸是第一限制，19．氨基酸(因其含 量偏低，使得稻米蛋白质中其它氨基酸不能被人体全部利用)， 对稻米营养品质起决定性的作用，提高了稻米赖氨酸的含量， 就提高了稻米蛋白质的利用率。福建每年稻谷产量有700万吨 左右，若提高了稻米赖氨酸的含量，从而相对提高10％蛋白质 利用率，即相当于每年可新增加4．94万吨优质蛋白质(一般推 广品种糙米蛋白质含量为8．5％左右)；相当于每年新增加37．14 万吨的鸡蛋。长期以来用常规的育种方法改良稻米中的赖氨酸 含量水平，未取得显著的进展。基因工程技术为改良水稻种子 蛋白质营养品质提供了有效的手段。 在四棱豆中发现的高赖氨酸蛋白，其赖氨酸含量高达11％， 并富含苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸。水稻蛋白赖氨酸含量为 0．31％。本研究选定在南方热带、亚热带推广的台湾优质粳稻品 种台粳9号为遗传转化受体材料，建立了台粳9号的高效遗传 转化体系，并依照该体系，通过农杆菌介导法将从四棱豆中克 隆出的高赖氨酸蛋白基因导入到台粳9号基因组中，并进行了 相应的分子检测，主要结果如下： 1、建立了台粳9号高频再生体系 研究不同外植体、不同培养基、分化培养基中不同的激素配 比以及生长素2，4一D浓度对愈伤诱导及再生的影响，建立了一 套台粳9号的高频再生体系：幼胚比成熟胚更容易诱导愈伤， 幼胚的最高诱导率为96．9％左右，而且长出的愈伤质量好；NB 培养基为最佳愈伤诱导和继代培养基；分化培养基的生长素与 培养基为最佳愈伤诱导和继代培养基；分化培养基的生长素与 细胞分裂素的比例要适当，0．05 mg．L-INAA+2．00mg．L-16一BA更 有利于提高台粳9号幼胚的分化率，分化率可达到7 3．2％；在 构建再生系统的过程中，添加2mg／L的2，4-D最适宜台粳9号 愈伤组织的生长。 2、建立了农杆菌介导的高效遗传转化体系 研究了农杆菌侵染液浓度、共培养时间及共培养时添加的乙 酰丁香酮浓度对GUS瞬时表达率的影响，确立了适于台粳9号 高效遗传转化的三个重要参数：(1)侵染菌液浓度约为OD600_1．0 时，GUS瞬时表达率为63．1％，是最适侵染浓度；(2)共培养时 间以不超过3d为宜；(3)共培养时加入的乙酰丁香酮可提高转 化率，浓度以l 00 uM较为适宜。 3、高赖氨酸蛋白基因遗传转化台粳9号，获得转基因植株 依照上述的遗传转化体系，采用农杆菌介导的方法将高赖氨 酸蛋白基因导入台粳9号幼胚诱导的胚性愈伤组织中，经潮霉 素筛选，抗性愈伤分化成苗，共获得2株转基因植株，对这些 植株及后代植株进行GUS染色和PCR及PCR Southern blot检 测分析，确定高赖氨酸蛋白基因已整合到台粳9号基因组中， 并能稳定遗传表达。经检测，转基因水稻糙米赖氨酸含量比对 照的0．27％提高29．3％，迭0．349％；转基因水稻秸秆赖氨酸含 量为0．341％，比对照提高8．3％。 关键词：台粳9号 高赖氨酸蛋白基因 遗传转化农杆菌 AbstractLysine Abstract Lysine is the first restrictive amino acid of rice protein，which plays critical role in defining the nutrition quality of rice．The utilization efficiency of rice protein be improved by increasing rice lysine content．In Fujian Province every year 7，000，000 tons of rice grain is produced and i