dna剪切修复对mptpmpp致帕金森病模型dna氧化损伤作用研究.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 复旦大学硕士学位论文 复旦大学硕士学位论文 DNA剪切修复对MPl限／MPP+致帕金森病模型肼姐氧化损伤的作用研究 二、中文摘要 帕金森病(Pad【inson’s diSea∞，PD)是仅次于是阿尔茨海默病的第二大神经退 行性疾病，其主要病理特征为黑质致密部大量多巴胺能神经元变性或丢失。研究 显示，PD病／l、黑质多巴胺能神经元内￡)NA氧化损伤严重，若不被及时有效的修 复，则可能导致神经元死亡。在多种DNA修复机制中，最主要和最重要的是DNA 剪切修复，它可以分为碱基切除修复(ba∞excision r印air，BER)和核苷酸切除 修复(nucleotide eXcision rel)air，NER)。BER和NER分别依赖于多种蛋白的相互 作用，其中，婚基目痢瓤)N蹦痦苷酶(8．0Xog岫nosiIle DNA gbrcosyla∞，OGGl) 是BER的限速因子；而着色性干皮病蛋白A、B、F、G(Xerodemlapi舯entosum 缸torA，B，F，GⅪ)A，XPB，)a吧ⅫG)是NER不可或缺的蛋白因子；细胞增殖核 抗原(proliferating cell nuclear锄tige玛PCNA)是BER和NER共同需要的蛋白因子； 以上蛋白的表达变化分别反映了细胞内BER和NER的修复活性变化。 然而，在PD等神经退行性疾病病理情况下，DNA氧化损伤与Ⅸ叮A剪切修复 的关系及其相关蛋白表达变化却仍未知。为探讨DNA氧化损伤与DNA剪切修复 在PD病理机制中的作用，本论文在MPP+(1．m甜lyl．4-phenyl．p舛dilli啪)致PCI2 细胞的PD细胞模型上采用相差显微技术和MTT实验观察了细胞的形态和活力变 化，并采用HocheSt染色观察细胞的凋亡情况，随后采用W．estI瞰1-blot技术检测了 BER相关蛋白OGGl和NER相关蛋白Ⅺ)A、ⅪB、ⅪF、ⅪG以及BER和NER共 同的蛋白因子PCNA的表达变化，最后用8．0Xo．7，8．dillydr0．2’-．deoxygu锄osil圮 (8．oxodG)免疫细胞化学染色技术研究了DNA氧化损伤情况；在MPllP (1．menlyl4-pllenyl-1，2，3，6-te昀bydrop如diIle)致C57BL／6小鼠的PD动物模型上 研究了黑质内BER和NER相关蛋白的表达变化情况，现将实验结果概述如下： 1．PCI2细胞的形态和活力变化 相差显微技术的结果显示，MPP+处理不同时间对PCI2细胞的形态影响不大， 但是处理24h后，细胞贴壁能力降低；而MTT实验结果显示，MPP+处理PCI2 细胞18h和24h后，细胞活力显著下降，分别降至78．6％和70．8％。 2．PCI2细胞的凋亡情况研究 我们进一步用Hochest染色来观察细胞的凋亡情况，结果显示，MPP+处理 PCI2细胞18h后，有凋亡细胞出现，24h后凋亡现象进一步发展，但是凋亡细 胞增加并不显著，提示MPP+氧化损伤并不显著增加凋亡细胞的数目。 复旦大学硕士学位论文 复旦大学硕士学位论文 DNA剪切修复对MPlP，^压PP+致帕金森病模型DNA氧化损伤的作用研究 3．PCI2细胞的BER和NER相关蛋白的表达变化 以上结果提示，MPP+氧化损伤对细胞形态和细胞的凋亡影响不大，但却时程 依赖性地使细胞活力显著降低，这可能与细胞内应对损伤的DNA修复能力降低 相关；已知MPP+是特异地介导细胞DNA氧化损伤的物质，而细胞应对DNA氧 化损伤的修复机制主要是DNA剪切修复，因此，我们采用Wbstenl-blot技术结 合光密度分析的方法检测了御P+处理不同时间后，PCI2细胞内BER和NER相 关蛋白的表达变化。光密度分析及统计结果显示，BER限速因子OGGl的表达 水平在处理1h后即显著升高，比对照升高5．0倍；3h后达到高峰，升高6．4倍； 之后依次下降，24h低于对照。与之对应的是，NER的各相关蛋白表达水平变化 显著，Ⅺ)A、ⅫB、)a)F、XPG和PCNA在MPP+处理1h后即显著上调，分别 增加4．2倍、2．0倍、2．0倍、2．7倍和1．9倍；随着MPP+处理时间的延长，各因 子的表达量继续上调，其中Ⅺ)A和PCNA分别在12h和3h达到高峰，分别增加 3．4倍和2．5倍，而)a)B、XPF和XPG均在18h到达高峰，分别增加3．4倍、3．9 倍和3．9倍；24h后，各蛋白表达水平均下降，其中PCNA显著低于对照。 4． PCI2细胞的DNA氧化损伤情况研究 以上结果提示，MPP+氧化损伤能上调BER和NER相关蛋白的表达水平，提示 细胞内DNA剪切修复能应对DNA氧化损伤，但随着MPP+处理时间的延长，BER 和NER的修复