合成高度不饱和脂肪酸去饱和酶的分子生物学研究II克隆表达与功能.PDF

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００８，２８（６ｓ）：２０１～２１４ 合成高度不饱和脂肪酸去饱和酶的分子生物学 研究ＩＩ．克隆、表达与功能分析 丁兆坤　麻艳群　许友卿 （广西大学水产科学研究所　南宁　５３０００４） 摘要　在生物体，高度不饱和脂肪酸（ｈｉｇｈｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄｆａｔｔｙａｃｉｄｓ，ＨＵＦＡｓ）发挥十分重要的生理 功能。然而，人和一些动物包括大多数海水鱼，因为缺乏合成ＨＵＦＡｓ所需的一或多种脂肪酸去饱 和酶或酶活性低，而不能合成ＨＵＦＡｓ，必须从食物中摄取。因此，研究合成ＨＵＦＡｓ去饱和酶具有 重要的理论意义和广阔的应用前景。综述了合成高度不饱和脂肪酸去饱和酶的分子生物学研 究，特别是其基因克隆、表达和功能分析。 关键词　高度不饱和脂肪酸（ＨＵＦＡｓ）　去饱和酶　基因　克隆　表达　功能 中图分类号　Ｑ７１ 　　ＨＵＦＡｓ是人和动物的必需脂肪酸（ｅｓｓｅｎｔｉａｌｆａｔｔｙ １　 ９去饱和酶 Δ ａｃｉｄｓ，ＥＦＡｓ），在维持机体的正常机能、促进生长、发 育、繁殖和提高成活率等方面发挥重要的生理作 １．１　蓝　藻 ［１～６］ 　　至今为止，对蓝藻去饱和酶的研究最为深入。 ９ 用 。然而，人及一些动物不能自行合成ＨＵＦＡｓ，必 Δ 须依赖外源ＨＵＦＡｓ，因其缺乏合成ＨＵＦＡｓ所必需的一 去饱和酶（又称为ｄｅｓＣ）存于所有的蓝藻，是调节生物 或多种脂肪酸去饱和酶或酶活性低所致。因此合成 合成不饱和脂肪酸的关键酶之一，酶的辅因子是铁。 ［７～１１］ ［１３］ ＨＵＦＡｓ去饱和酶的研究成为当前热点之一 。 　　１９９４年，Ｓａｋａｍｏｔｏ等 在分离多变鱼腥蓝藻 ［１２］ （Ａｎａｂａｅｎａｖａｒｉａｂｉｌｉｓ）１２去饱和酶基因时，发现了 ９ 　　１９９３年，Ｒｅｄｄｙ等 首先成功地从一株产ＧＬＡ的 Δ Δ 蓝藻（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３）克隆了 ６去饱和酶 去饱和酶基因的开放阅读架（ｏｐｅｎｉｎｇｒｅａｄｉｎｇｆｒａｇｍｅｎｔ， Δ 基因，并在另一株 ６去饱和酶缺陷的蓝细菌 ＯＲＦ），所编码的多肽与其它去饱和酶相似，在大肠杆 Δ （Ａｎａｂａｅｎａｓｐ．ＰＣＣ７１２０）进行功能表达，推动了 ６去 菌（ＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａＣｏｌｉ）表达能催化 Ｃ１８：０脂肪酸脱氢形 Δ 饱和酶遗传学水平的研究，并促进各种脂肪酸去饱和 成Ｃ１８∶１，但不能催化 Ｃ１６：０形成 Ｃ１６：１。该酶与小 酶的物理化学、生物化学和分子生物学研究，取得了许 鼠、大鼠和酿酒酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｖｉｓｉａｓｅ）的硬脂酰 ＣｏＡ去饱和酶比较，两者的氨基酸序列相似度 ２５％， 多新进展。 　　合成 ＨＵＦＡｓ的脂肪酸去饱和酶广泛分布在微生 但是，两个保守区（ＨＸ、ＸＨＨ）的相似度很高。