霉酚酸酯抑制转化生长因子-β在肺成纤维细胞中的表达及应用价值.docVIP

霉酚酸酯抑制转化生长因子-β在肺成纤维细胞中的表达及应用价值 王 颖，万，跃，谭 兵，蒋 勇，白 玉，吴永忠(400030 重庆，重庆市肿瘤研究所放疗科) [摘要]目的 探讨霉酚酸酯（mycophenolate mofetil，MMF）抑制转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）在肺成纤维细胞WI26中的表达和应用价值。方法 肺成纤维细胞WI26常规细胞培养后分4组：对照组、MMF组、TGF-β组、MMF +TGF-β组。采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR) 检测TGF-β介导相关基因COL1A1的表达，Western blot和氯霉素乙酰基转移酶实验(chloramphenical acetyl transferase，CAT)方法检测COL1蛋白的表达；胶原基质收缩试验和细胞伤痕试验观察胶原纤维的收缩和细胞移行能力的差异。结果 MMF作用细胞24、48 h后，COL1A1 mRNA表达分别为对照组的（77.0±2.9）%和（38.0±3.7）%（P均0.05），MMF降低了COL1A1 mRNA水平；TGF-β作用细胞24、48 h后，COL1A1 mRNA表达分别为对照组的（134.0±3.1）%和（189.0±2.4）%（P均0.05），TGF-β提高了COL1A1 mRNA水平；MMF+TGF-β作用细胞24，48 h后，COL1A1 mRNA表达分别为对照组的（95.0±2.7）%和（71.0±3.3）%（P均0.05），48 h后MMF阻止了TGF-β诱导的COL1A1 mRNA表达。48 h后MMF组COL1蛋白表达为对照组的（44.0±1.9）%（P0.05）；TGF-β组COL1蛋白表达为对照组的（145.0±1.5）%（P0.05）；MMF+TGF-β组COL1蛋白表达为对照组的（79.0±2.5）%，MMF阻止TGF-β诱导的 COL1蛋白表达。胶原基质收缩试验（第0﹑1﹑5天观察）和细胞伤痕试验（第0﹑8﹑24小时观察）结果显示：MMF重建成纤维细胞的接触抑制生长。结论 MMF能阻止TGF-β介导的细胞纤维化。 [关键词]MMF；转化生长因子-β；肺成纤维细胞WI26 [中图法分类号] [文献标志码]A To study the ability of Mycophenolate mofetilto antagonize the profibrotic of TGF-β in fibroblast cell lines Wang Ying, Wan Yue, Tan Bing,Jiang Yong,Wu Yongzhong （The Chongqing Cancer Institute, Chongqing 400030, China） 【Abstract】　Objecitve: To study the ability of MMF (Mycophenolate mofetil) to antagonize the profibrotic of TGF-β (Transforming growth factor-β) in fibroblast cell lines (WI26 cells) and explore new method for the treatment of radiation pneumonitis. Method： The expression of COL1A1 mRNA was measured by using reverse transcriptase-polymerase chain reaction (RT-PCR); To detecte type I collagen production by using Western Blot; CAT (Chloramphenical Acetyl Transferase)assay was used to study COL1 transcriptionnal activity; Experimental contraction(MMF and TGF affect cell contractility) was studed using free collagen lattice assay; Scratch assay is to observate the capacity of cell transition. Result TGF-β increases COL1A1 mRNA levels .TGF-β acts on WI26 cell 24 hours, 48 hours, C