基因芯片原位合成新材料和结果分析新方法研究-物理化学专业论文.docxVIP

摘 摘 要 近年来，借助固相原位合成技术或探针固定化技术制备微型基因芯片进行DNA杂交分 析引起了人们的广泛兴趣。目前用作DNA微阵列原位合成的基片材料多为玻璃片和硅片等， 而聚丙烯膜、尼龙膜等微孔膜大多用于点样法生物芯片的制备。但玻璃具有不易加工成特殊 形状的缺点，而膜又有强的荧光背景。我们首先采用等离子体接枝技术对几种常见的有机聚 合物材料进行了表面功能化改性。以探索新的易加工和更加实用的寡核苷酸原位合成基片材 料。此外，还初步探索了时间分辨荧光方法在生物芯片杂交结果分析中的应用。 r一、H2和N2混合气体等离子体处理聚丙烯微孔膜，采用扫描电镜观察了处理前后膜的 一、、3 形貌变化：真空全反射红外光谱、x一射线光电子能谱和紫外光谱证实在其表面接技了大量活 性氨基：用紫外光谱定量计算得知，所接枝的氨基密度为0．59 I．tmol／cm2，远高于功能化玻璃 上的氨基密度。该改性膜适合于DNA的原位合成，并可得到98％以上的偶联效率，是一种 新型的DNA原位合成基材。 二、以正交试验法优化聚四氟乙烯等离子体处理条件，并对最佳条件下处理的聚四氟乙 烯用x．射线光电子能谱和紫外光谱进行了表征确认。同时，在改性后的聚四氟乙烯上合成了 寡核苷酸探针，利用其与荧光标记的靶序列杂交，分析了正配与错配序列在荧光强度上的区 别。结果表明聚四氟乙烯是～类比聚丙烯微孔膜更理想的DNA原位合成基材。 三、合成了4，7-二氯磺酰苯基-l，10-菲罗啉-2，9-二羧酸(BCPDA)，产物和中间产物均用 红外光谱、核磁共振谱和元素分析进行了表征；而且通过条件优化，总产率达到了89．4％， 比文献值提高了17．3％。同时，我们对BCPDA-Eu”进行了荧光分析和时间分辨荧光测定。 结果显示在lO12～10‘8mol／L浓度范围内，螯舍物的时间分辨荧光强度与浓度具有线性关系 从而可对联有BCPDA的靶序列进行定性和定量分析Ⅳ 关键词：等离子体，氨基，聚丙烯微孔膜，聚四氟乙烯，时间分辨荧光，BCPDA 鼍瞄f乜 AbstractAbstract Abstract Abstract In recent years，there has been considerable interest in developing highly parallel DNA hybridization assays on miniaturized flat substrates or“chips”-a series ofdifferent oligonucleotide sequences are immobilized on substrates by means of solid phase加situ synthesis and probe immobilization techniques．At present．the substrates ofin situ synthesis ofmicroarray arc usually glass slides and silicon wafers．Because of their strong fluorescent background and isotope detection necessity,microporous membranes such as polypropylene and nylon are mainly used for the spotting method and detected by means of[y-32p]ATP labels．We at fimt applied plasma to funetionalize several usual polymers so as to search for new,simpler in processing and more practical substrates for in situ synthesis of DNA microarray．In addition，a new chelator for time’resolved fluoroimmunoassay～4，7一bis(chlorosulfophenyl)-1，10．phenanthroline-2，9． dicarboxylic acid(BCPDA)has been synthesized as well as its initial application in the hybridization and fluorescence detection ofgene chips was tested． 1·Polypropylene microporous membrane was