前列腺癌来源的外泌体诱导去势抵抗性产生的作用及机制的研究-泌尿外科专业论文.pdf.docxVIP

删y31 删y31 1誉7删142 前列腺癌来源的外泌体诱导去势抵抗性产 生的作用及机制的研究 博士研究生：张一鸣 指导教师：刘春晓 中文摘要 研究背景 前列腺癌不仅是泌尿外科最常见的男性恶性肿瘤，也是引起男性肿瘤相关 性死亡的第二大杀手。在美国，前列腺癌的发病率已经超过肺癌，成为发病率 最高的男性恶性肿瘤。研究显示随着我国国民的生活饮食方式等逐渐西化，我 国特别是经济发达地区泌尿外科接诊的前列腺癌患者日趋增多，有可能会成为 我国男性肿瘤发病率的第一位，严重威胁我国男性公民的健康。由于早期前列 腺癌缺乏明显的症状，因此容易被忽视而错过了最佳的治疗机会。而此时晚期 患者大部分已经出现局部或远处转移，能采用的治疗方法包括内分泌治疗、化 疗或姑息治疗等。目前临床上首选的是内分泌治疗，对于激素敏感性前列腺癌 疗效佳，但是病情最终会发展为去势抵抗性前列腺癌(castration．resistant prostate cancer，CRPC)。 去势抵抗性前列腺癌是指经过初次持续雄激素剥夺治疗(ADT)后疾病依 然进展的前列腺癌，应同时具备以下条件：(1)血清睾酮达去势水平(50ng／dl 或1．7nmol／L)；(2)间隔1周，连续3次PSA上升，较最低值升高50％以上， 此时内分泌治疗基本无效。目前研究提示激素依赖性前列腺癌发展为去势抵抗 性前列腺癌可能与以下机制相关：(1)前列腺癌干细胞的存在；(2)凋亡相关 癌基因和抑癌基因的及通路的异常表达；(3)配体非依赖性雄激素受体活化；(4) 雄激素受体超活化；(5)雄激素受体变异。但是到目前为止，具体的机制尚不 明确。而且近年来越来越多的研究显示整个转变的过程可能存在其他的机制， 万方数据 中文摘要特别是“细胞外”的机制。 中文摘要 特别是“细胞外”的机制。 对于细胞来说，前列腺癌从激素依赖性转变为去势抵抗性是一个漫长的转 变过程。在这个过程中，促进发生转变的不仅仅是细胞本身，还包括了细胞周 围的环境持续刺激。而肿瘤周围的环境又称为肿瘤微环境，是指肿瘤在其发生 和发展过程中所处的内环境，它是一个复杂的综合系统，里面包含了肿瘤细胞 自身、多潜能基质细胞或间充质干细胞、成纤维细胞、微血管、上皮细胞前体 细胞以及各种各样的免疫细胞和分泌的细胞因子。肿瘤微环境不仅可以为肿瘤 的生长提供“肥沃的土壤”，而且还可以还对肿瘤的恶变产生巨大的诱导作用， 引起肿瘤细胞发生持续性的基因和表型的改变，使其具有生长优势的能力，能 够适应环境的改变。目前，已有大量的研究发现肿瘤微环境可以促进各种肿瘤 包括前列腺癌的增殖、抑制凋亡、诱导血管形成、抑制免疫系统和逃避免疫检 测、激活免疫细胞促进侵袭转移等。 在肿瘤微环境的研究中，目前研究的热点是细胞外囊泡。细胞外囊泡是细 胞与细胞之间交流除外细胞因子的另一种新方式。它是双层脂质构成的囊泡， 直径在30～2000nm，内含蛋白、脂质和核酸。研究表明，细胞外囊泡不仅参与 正常的生理调节活动，而且参与多种的病理生理过程，包括肿瘤、炎症性疾病、 自身免疫和神经退行性病变。其中肿瘤细胞来源的细胞外囊泡与肿瘤的恶变关 系密切，参与调节肿瘤细胞生长、侵袭、转移和血管形成。根据生物合成的过 程，细胞外囊泡主要分为外泌体和微囊泡两大类。其中由于外泌体在胞质内合 成且富含活性蛋白、脂质和核酸而发挥主要作用。已有研究证实，外泌体与前 列腺癌的进展密切相关，包括化疗耐药、免疫抑制、增殖、凋亡和血管形成。 但是目前尚没有研究报道外泌体是否参与调节前列腺癌从激素依赖性进展为去 势抵抗性的过程。 本次课题研究，我们首先探讨了肿瘤微环境在前列腺癌细胞出现激素抵抗 的过程中发挥的作用，继而从激素非依赖前列腺癌细胞(androgen independent prostate cancer，AIPC)提取了外泌体并加入到激素依赖性前列腺癌细胞 II 万方数据 博士学位论文(androgen 博士学位论文 (androgen dependent prostate cancer，ADPC)中，通过体外和体内实验观察外 泌体对前列腺癌细胞发生激素抵抗的影响，最后使用基因芯片和高效液相色谱／ 质谱探讨其中的作用机制，为延缓前列腺癌进展为去势抵抗性前列腺癌提供分 子基础，并为进一步治疗干预提供新的方向。 研究目的 1．探讨肿瘤微环境在前列腺癌进展为激素非敏感这个过程中所起的作用。 2．验证外泌体是否参与前列腺癌进展为去势抵抗性前列腺癌这个过程。 3．探讨外泌体在去势抵抗发生、发展的过程中的作用机制。 研究方法 1．LNCAP细胞与PC．3细胞共培养可以促进LNCAP细胞出现激素抵抗 1)通过Transwell共培养系统，将LNCAP细胞置于上室，PC．3细胞置于 下室，两种细胞进行共培养，4周后细胞用于后续