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玫瑰孢链霉菌代谢达托霉素及豪氏变形杆菌铜抗性的蛋白质组学研究-生物化工专业论文
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厦门大学学位论文著作权使用声明本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办
厦门大学学位论文著作权使用声明
本人同意厦门大学根据《中华人民共和国学位条例暂行实施办 法》等规定保留和使用此学位论文,并向主管部门或其指定机构送交 学位论文(包括纸质版和电子版),允许学位论文进入厦门大学图书 馆及其数据库被查阅、借阅。本人同意厦门大学将学位论文加入全国 博士、硕士学位论文共建单位数据库进行检索,将学位论文的标题和 摘要汇编出版,采用影印、缩印或者其它方式合理复制学位论文。
本学位论文属于:
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于 年 月 日解密,解密后适用上述授权。
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应是已经厦门大学保密委员会审定过的学位论文,未经厦门大学保密 委员会审定的学位论文均为公开学位论文。此声明栏不填写的,默认 为公开学位论文,均适用上述授权。)
声明人(签名):计写也菇
刃f4年箩月27日
摘要摘要
摘要
摘要
蛋白质组学作为一门新兴学科,其发展迅速、应用领域越来越广泛。本研究 以蛋白质组学技术为核心手段,对玫瑰孢链霉菌生产达托霉素的机理及豪氏变形 杆菌的抗铜机制展开研究,试图从蛋白调控水平阐释其机理。
经研究发现玫瑰孢链霉菌生产达托霉素需要前体添加物的刺激,前体是达托 霉素合成的必要条件。本文针对以癸酸和癸酸钠为前体,其中前者是目前很多报 道中很常见的前体,而后者则尚未任何文献有相关报道。实验结果表明癸酸钠作 为前体添加的效果要明显优于癸酸,这主要是由于其具有较好的水溶性,较易被 细胞吸收利用。本研究首次从蛋白入手对玫瑰孢链霉菌进行分析,并阐释其代谢 机理。
正因为前体对达托霉素的生产起着至关重要的作用,为了进一步了解前体刺 激达托霉素合成的机理,本研究试图用蛋白质组学技术加以说明。实验中,对添 加前体和不添加前体两组比较分析其一维蛋白质电泳(sDS。PAGE)、串联质谱 (MALDI—TOF.MS/MS)和液质联用质谱(LC—MS/MS)的结果。在一维蛋白电 泳偶联质谱分析结果中鉴定出假定调节蛋白(Putative regulato巧protein)、鸟苷 五磷酸合成酶(Guanosine pent印hosphate synthetase)、多核苷酸磷酸化酶 (Polyribonucleotide nucleotidyltraJlsferase phosphorylase,PNPase)、假定三肽氨
基肽酶(P喇ive secreted tripeptidylaIllino peptidase)、假定双组份系统组氨酸激
酶(Putative柳。一component system llistidine kmase)这五个蛋白,它们与达托霉 素的合成及分泌有密切关联。随后,本研究采取LC.MS/MS分析前体影响下的 玫瑰孢链霉菌全蛋白质组学,在加前体和不加前体的条件下分别鉴定出601和 935个蛋白,其中差异蛋白数为357和691。实验中对这些蛋白进行了分子量和 等电点的区段划分,并且模拟了双向电泳图谱。根据功能作用的区别,差异蛋白 被分成了14个类别,其中转运及膜功能蛋白(transport/membralle缸1ction)差 别最大,其在添加前体实验组中占12.4%,但在不添加前体实验组中只占了5.2%。 最后,结合达托霉素合成基因簇信息,在差异蛋白中发现了5类与达托霉素 合成相关的蛋白,分别为抗性蛋白(resistance protein)、ATP结合盒式转运蛋白 (ATP-binding cassette transponer,ABC transponer)、酰基载体蛋白(acyl ca玎ier
摘要protein)
摘要
protein)、甲基转移酶(methyl缸.觚sferase)和调节蛋白(regulator),而且在加前 体条件下较不加前体多。但在这些蛋白中并没有直接合成达托霉素的多肽合成 酶,根据结果推测前体是通过影响达托霉素合成调节蛋白来促进达托霉素的合 成。
另外,本文运用一维蛋白电泳、二维蛋白电泳及LC.MS/MS阐释豪氏变形 杆菌的抗铜机制。实验发现,铜的添加使得豪氏变形杆菌的膜蛋白变多,这可能 与建立抗铜性的IⅢD系统关联。另外,在豪氏变形杆菌中存在二硫键异构酶, 它能修复铜破坏的二硫键,使细胞能持续存活。而且铜使得豪氏变形杆菌的外膜 通道蛋白表达受到抑制,从而减少铜向细胞内的运输,维持细胞内铜含量的正常 水平,使豪氏变形杆菌在高浓度铜条件下依然能存活,但因为其泳动能力下降, 故抗铜机制亦能利用在抑制其致病性上。
关键词:蛋白质组学
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