NY/T 683-2003犬传染性肝炎诊断技术.pdf

ICS 11.220 R 41 中华 人 民共 和 国农 业 行 业标 准 NY/T683-2003 犬传 染 性肝 炎诊 断技 术 canni e hepatitis Diagnostictechniquesforinfectious 2003-07-30发布 2003-10-01实施 中华人民共和国农业部 发 布 NY/T683-2003 月U 舌 本标准的附录A为规范性附录 本标准由农业部畜牧兽医局提出并归口 本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。 本标准主要起草人:田克恭、王宏伟、遇秀玲、陈西钊、王传彬、杨秀勇。 NY/T683-2003 犬传 染性 肝 炎诊 断技术 1 范围 本标准规定了犬传染性肝炎(ICH)的临床诊断、犬传染性肝炎病毒(ICHV)的分离与鉴定、酶联免 疫吸附试验和免疫酶组织化学方法等诊断技术。 本标准适用于犬传染性肝炎的诊断。 2 临床诊断要点 2.1 临床症状 最急性病例，患犬在呕吐、腹痛和腹泻等症状出现后数小时内死亡。急性型病例，患犬体温呈马鞍 型升高，精神抑郁，食欲废绝，渴欲增加，呕吐，腹泻，粪中带血。亚急性病例，特征性症状是患犬角膜一 过性混浊，即“蓝眼”病，有的出现溃疡。慢性病例多发于老疫区或疫病流行后期，患犬多不死亡，可以 2,.i2t: 病理变化 病犬主要表现全身性败血症变化。在实质器官、浆膜、粘膜上可见大小、数量不等的出血斑点。肝 肿大，呈斑驳状，表面有纤维素附着。胆囊壁水肿增厚，灰白色，半透明，胆囊浆膜被覆纤维素性渗出物， 胆囊的变化具有一定的诊断意义。 3 病毒分离与鉴定 3.1 材料准备 3.1.1 试荆 3.1.1.1改良最低要素营养液(DMEM)培养基，配方见第A.I章 3.1.1.2 犬肾传代细胞(MDCK细胞)。 3.1.1.3 标准阳性血清:ICHV单克隆抗体，中和抗体效价1，1024. 3.1.1.4 标准阴性血清:无ICHV感染的犬血清。 3.1.1.5 新生牛血清，青霉素，链霉素 3.1.2 器材 a) 细胞培养瓶; b) 吸管; c) 二氧化碳培养箱; d) 37℃恒温水浴箱; c) 普通冰箱及低温冰箱; f) 离心机及离心管; 9) 研磨器械; h) 普通光学显微镜; ;) 微量加样器，容量5VL-50p1-50pL-200PL; j)0.45pm微孔滤膜。 3.1.3 样品 ICHV存在于病犬扁桃体、肝脏、脾脏等组织器官中。无菌采集这些器官用无血清DMEM制成 20N组织悬液.3000r/min离心30min。取上清 10000r/min离心20min，取上清用于 ICHV分离。 NY/T683-2003 3.2 操作方法 3.2.1 细胞培养 用含8%新生牛血清的DMEM培养基，在37C一培养MDCK细胞。每3d-4d传代一次，细胞长 成单层时，用于ICHV分离。 3.2.2 病料接种 将。.1m1处理好的组织悬液接种MDCK细胞，37℃吸附Ih，加人无血清DMEM继续培养3d- sd，观察结果 3.2.3 结果观察 ICHV感染MDCK细胞3d-5d表现为细胞增大变圆、变亮、折光性增强、聚集成葡萄串状。若第 一次接种未出现细胞病变，应将细胞培养物冻融后盲传三代。如仍无细胞病变，则判为ICHV检测 阴性。 3.2.4 ICHV的鉴定 将出现细胞病变的细胞培养物，用 1%人 “)’(，型红细胞进行血凝试验，血凝试验阳性者，再用ICHV 单克隆抗体进行血凝抑制试验，鉴定毒株。 酶联免疫吸附试验 4.1材料准