质粒载体的概况及构建.pptx

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2019-01-20 发布于江苏
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质粒载体的概况及构建.pptx

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质粒载体的概况及构建

质粒载体的概况及制备 ;质粒的定义、命名; （一）质粒的定义、命名; 质粒（plasmid）;(1) 自主复制性;（3）可扩增性;（4）可转移性; （三）质粒的分类 ;质粒的制备;（1）碱裂解法原理：利用溶菌酶在NaOH与SDS的混合溶液中破坏细菌外壁，去除染色体DNA及变性蛋白质，离心，苯酚—氯仿溶液处理，乙醇或异丙醇沉淀水相质粒。特点：质粒较纯，收获率高，繁琐且有开环现象;（2）沸水浴法;用限制性内切酶消化DNA样品用限制性内切酶消化质粒DNA 连接样品DNA和质粒DNA的消化产物用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞涂布在琼脂平板上进行耐抗菌素筛选;④ 用连接产物转化大肠杆菌感受态细胞时转化细菌有两个基本方法：一是化学法，即用CaCl?处理并加热激以促进DNA进入菌体；二是电激法，即施加短脉冲的电荷以促进DNA吸收。;⑤ 筛???时会有三种结果：一是要插入的序列自连，结果没有菌落形成；二是切开的质粒重连，结果表现为蓝色菌落；三是要插入的序列与质粒相连产生白色的抗氨苄青霉素菌落。;THANKS