氟虫腈与昆虫gaba受体相互作用的研究高分子化学与物理专业论文.docxVIP

上海师范大学硕士学位论文 上海师范大学硕士学位论文 目录 目录 摘要 ．I Abstract ． I I 第一章前言 l 1．1丫一氨基丁酸受体及氟虫腈配体的简介 ．．1 1．I．I哺乳动物及昆虫GABA受体的介绍 l l-1．2家蝇GABA受体的研究进展 3 l-1．3氟虫腈(Fiproni l)毒性 一4 1．2亲和实验 5 1．2．1亲和实验的原理 ．．5 1．2．2亲和实验的方法 一6 1．3模拟方法及工作平台简介 ．8 1．3．1模拟方法 ．8 1．3．2工作平台 ．1 1 1．4 GABA受体分离纯化的方法 ．．12 1．4．1提取组织蛋白 12 1．4．2受体蛋白的分离纯化方法 l 5 1．5论文的研究内容、目的及意义 18 1．5．1论文的研究内容 18 1．5．2论文的目的及意义 18 第二章荧光标记法研究受体配体相互作用 20 2．1实验部分 ： 20 2．1．1实验试剂 ．． 20 2．1．2实验仪器 ．2l 2．2实验过程 21 2．2．1家蝇脑GABA受体粗提物的制备n“ ．21 2．2．2制备氟虫腈荧光探针(FITC-fiproni l)“2 21 2．2．3氟虫腈荧光配体与受体的结合实验 22 2．3结果与讨论 23 2．3．1合成氟虫腈荧光探针 ．23 2．3．2荧光标记法测定亲和常数 24 2．4结论 ．26 第三章分子模拟法研究受体配体相互作用 28 3．1研究内容 28 3．1．1果蝇RDL受体的同源建模 28 3．1．2氟虫腈与果蝇RDL受体对接 29 3．1．3 RDLR一氟虫腈复合物的分子动力学模拟(MD Simulation) 29 3．2结果与讨论 29 3．2．1构建模型 ．30 3．2．2分子对接 ．30 万方数据 上海师范大学硕士学位论文 上海师范大学硕士学位论文 目录 3．2．3受体一配体复合物的稳定性 ．32 3．3结论 ．34 第四章家蝇脑内GABA受体的分离纯化 35 4．1实验部分 35 4．1．1实验试剂 ．35 4．1．2实验仪器 ．37 4．2实验方法 37 4．2．1制备氟虫腈亲和柱 37 4．2．2制备家蝇脑内GABA受体粗提物 ．38 4．2．3家蝇脑内GABA受体粗提物的超滤与浓缩 38 4．2．4浓缩蛋白的亲和层析 39 4．2．5亲和层析蛋白的离子交换层析 39 4．2．6测定家蝇脑内GABA受体的浓度 ．40 4．2．7 SDS—PAGE凝胶电泳 一41 4．3结果与讨论 43 4．3．1表征亲和介质 43 4．3．2家蝇脑GABA受体亲和纯化前后的SDS电泳图比较 ．43 4．3结{仑 44 第五章结论、展望与创新 ．45 5．1结论 ． ．45 5_2展望 45 5．．3创新 ．46 参考文献 o ．47 攻读学位期间取得的研究成果 一55 致谢 ．．56 论文独创性声明 57 万方数据 上海师范大学硕士学位论文 上海师范大学硕士学位论文 第一章前言 第一章前言 1．1 Y．氨基丁酸受体及氟虫腈配体的简介 Y．氨基丁酸(丫一aminobutyric acid，GABA)是脊椎动物及昆虫中枢神经系统 (Central Nervous System，CNS)中的一种重要的抑制性神经递质，而Y-氨基丁酸 受体(GABAR)是广泛分布于脊椎动物和昆虫中枢神经系统内的一种主要的抑制 性受体。GABA与GABAR结合后开放氯离子通道，cl。流入细胞内部，使细胞 膜超极化，从而抑制神经元的兴奋性而对生物体的神经传导产生抑制作用11-4]。 GABA受体不仅是硫：H-(endqsulfan)，林丹(1indane)，氟虫腈(邱ronil)和阿维 菌素(avermectins)等杀虫剂的作用靶标【5-71，同时也是治疗失眠(inso衄ia)，酒精中 毒(alcoholism)，癫痫(epilepsy)，帕金森综合症(parkinsonism)，精神分裂症 (schizophrenia)币N低脏～(mental deficiency)等疾病的药物作用靶点【}91。GABA受体 在分子结构上存在多种药物的作用位点，一直是相关领域的研究热点。 氟虫腈是作用于GABA受体的一种苯基毗唑类杀虫剂，通过与昆虫GABA 受体结合，阻断氯离子通道，导致昆虫神经和肌肉过度兴奋而死亡110-13]，对半翅 目、鳞翅目、鞘翅目害虫以及对环戊二烯类、菊酯类、氨基甲酸酯类杀虫药剂产 生抗性的害虫均有较高的生物活性。 1．1．1 Pfl$孚L动物及昆虫GABA受体的介绍 根据哺乳动物GABA受体对药物