表达新城疫病毒hn蛋白重组鸭肠炎病毒的构建生物学;动物学专业论文.docxVIP

Classified Classified Index： Code：10224 Confidential(yes／no)：no NO．120910766 Dissertation for the Master Degree Constuetion of Recombinant Duck Enteritis Virus Expressing HN Protein of Newcastle Disease Virus Candidate：Liang Shulin Supervisor：Professor Liu Shengwang Degree Category：Master of Science College：College of Life Science First level discipIine：Science Second level discipline：Z00109y Harbin China June 2015 万方数据 摘要 摘要 I 英文摘要 ⅡI 1前言 1 1．1新城疫概述 ．1 1．1．1新城疫的病原学和流行病学 ．1 1．1．2新城疫疫苗的发展状况 1 1．2新城疫病毒的研究概况 ．3 1．2．1新城疫病毒形态结构 ．．3 1．2．2新城疫病毒基因组特点 3 1．2．3新城疫病毒结构蛋白的分布和功能 3 1．3鸭病毒性肠炎概述 6 1．3．1鸭病毒性肠炎的病原学和流行病学 6 1．3．2鸭病毒性肠炎的临床症状 ．．7 1．3．3鸭病毒性肠炎的防治与疫苗 ．．7 1．4鸭肠炎病毒的研究概况 ．7 1．4．1鸭肠炎病毒的生物学特性 ．．7 1．4．2鸭肠炎病毒的基因组 一8 1．4．3鸭肠炎病毒的分子生物学研究进展 8 1．5疱疹病毒作为疫苗载体的研究进展 9 1．6研究目的意义 ．10 2材料和方法 ．．11 2．1实验材料 ．．11 2．1．1病毒与鸡胚 ．11 2．1．2载体、质粒与菌种 ．11 2．1．3主要仪器设备 ．11 2．1．4酶类与主要生化试剂 11 2．1．5引物 ． ．．12 2．2重组病毒rDEV TK．HN的构建 ．．12 2．2．1同源臂pTK的扩增和克隆 12 2．2．2转移载体pTK．HN的构建 ．．16 2．2．3转移载体pTK．HN与病毒rDEV TK．EGFP基因组的共转染 18 2．2．4重组病毒rDEV TK．HN的筛选和鉴定 19 2．2．5重组病毒rDEV TK．HN的复制动力学 ．．20 万方数据 东北农业大学理学硕士论文2．2．6重组病毒rDEV 东北农业大学理学硕士论文 2．2．6重组病毒rDEV TK．HN遗传稳定性 21 2．3 TK和USl0基因双缺失重组鸭肠炎病毒的构建 ．．2l 2．3．1转移载体pUSlO．EGFP与病毒rDEV TK．HN基因组共转染 21 2．3．2重组病毒rDEV TK．HN＼USlO．EGFP蚀斑纯化 21 2．3．3重组病毒rDEV TK—HN＼US 10．EGFP鉴定 22 3结果与分析 ．．23 3．1重组病毒rDEV TK．HN的构建 23 3．1．1同源臂pTK的鉴定 ．23 3．1．2转移载体pTK．HN的鉴定 23 3．1．3重组病毒rDEV TK．HN的蚀斑纯化与鉴定 一25 3．1．4重组病毒rDEV TK．HN遗传稳定性鉴定 ．．29 3．2重组病毒rDEV TK．HN＼USl0-EGFP的构建 ．32 3．2．1重组病毒rDEV TK．HN＼USl0．EGFP的蚀斑纯化 32 3．2．2重组病毒rDEV TK—HN＼USl0．EGFP的PCR检测 ．33 4讨论．． ．． ． ． 35 4．1重组鸭肠炎病毒的构建 35 4．1．1重组病毒载体及其缺失位点的选择 35 4．1．2重组病毒外源基因的选择 ．．35 4．2重组病毒的纯化和鉴定 36 4．2．1重组病毒rDEv TK．HN的纯化和鉴定 36 4．2．2重组病毒rDEV TK．HN＼USl0-EGFP的纯化和鉴定 36 4．3重组病毒的特性研究 ．36 5结论 ．．38 致谢 ．．39 参考文献 40 攻渎硕士学位期间发表的学术论文 ．46 Ⅱ 万方数据 CONCEN’TSCONTENTS CONCEN’TS CONTENTS Abstract in Chinese． ．． ． ．． ．．． ．．．． ． ．． ． ．．．． ．． ． ． ． ．． ． ．． ． j Abstract in English．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．． ．．．．．．．．．．．．．．．．．， ． ．． ．．．． ．．． ． ．．．．．．． ． I]I 1 Introduction ．．1 1．1 Summary ofNe