苍蝇群落演替及mtdna分子标记的法医学研究法医学专业论文.docxVIP

oq)】l大学博十学位论文 oq)】l大学博十学位论文 蔡继峰 法医病理学 引 言 自然界中，昆虫不仅取食尸体，帮助大量微生物进入尸体，加快尸 体崩解。而且在尸体所经历的新鲜、肿胀、腐烂、干化等不同腐败阶段， 昆虫种类组成和数量变化不同。这种类群与数量的变化就是生态群落演 替的一个典型范例，也是法医昆虫学最基本的原理。 法医昆虫学研究的主要内容就是对在尸体内、尸体表面或尸体附近 采集到的昆虫标本，经检验、鉴定、分类，明确昆虫种类或者确定昆虫 所处某一生长发育状态，结合该昆虫在尸体上的演替状况，帮助法医推 断死亡时间；同时，各种昆虫都有一定的地理分布范围和适合生存的场 所，将采集到的昆虫种类与尸体所在环境的昆虫种类进行比较，如果发 现二者种类有矛盾，例如：在特定环境下应该出现的昆虫没有出现，不 该出现的昆虫反而出现了，可以帮助判断尸体有被转移过的可能性。正 因如此，法医昆虫学与法医病理学联系密切，在推断死亡时间、死亡现 场等方面具有明显的优势。从昆虫学角度来解决法医病理学死亡时间、 死亡现场等方面推断的关键性问题。 法医昆虫学研究的对象是与尸体有关的昆虫(嗜尸性昆虫)。在法医 学实践中，与尸体关系最为密切的昆虫主要是双翅目和鞘翅目昆虫。相 比较而言，双翅目中的苍蝇是研究和实际应用最多的类型。因此，本研 究在呼和浩特地区，经室外多地点，以家兔、狗、猪尸体为材料，研究 各种嗜尸性昆虫，尤其是苍蝇在尸体上出现时间及部位的规律性，以用 于法医解决死亡时间推断等问题。 应用尸体上昆虫生态群落演替原理解决死亡时间推断等问题，首要 的任务是鉴定昆虫种类。目前依据苍蝇成虫形态学解剖特征鉴定苍蝇成 虫种类的技术已经比较成熟。比较困难的是对苍蝇幼虫生长发育规律的 四川大掌孳士拿生圣士 四川大掌孳士拿生圣士 蔡继峰 法医病理学 把握，班爻苍建幼虫、蛹、卵依据形态学特征很难鉴定种属的问题。这 就要求在j子生物学领域探索一些切实可行的鉴定种属方法。 近车罴．蚕外有人尝试利用DNA序列分析技术通过直接比较不同种 类的同澡畦虽的核苷酸排列顺序，构建系统发育树，推断它们的系统演 化关系，兰一步解决嗜尸性苍蝇种类鉴定问题。此方法在法医昆虫种类 鉴定的研究丰比较有效、可靠。在种内或近缘种的系统发育关系确定方 面，通常是连，七较快的mtDNh片断，其中CO I和COII(细胞色素氧化酶 辅酶I和ⅡI以及16S rDNA包含了大量的信息，可以把苍蝇鉴定到种的 水平。 本研究垄我国首次对采自呼和浩特和成都地区的7种近百个嗜尸性 苍蝇毗DH上COI和COII中278bp和635bp的基因序列进行检测，构 建系统发育拷，结果表明能够区分绝大多数的种。然而，对于亲缘关系 非常接近篆颢绿蝇和丝光绿蝇来说，由于二者的种内、种间进化分歧均 数非常接近，则很难区别。但是，利用16SrDNA中513bp基因序列，可 解决这一难题。 此外，本研究通过GenBank中BLAST检索系统检索世界性研究相对 普遍的果廷mtDNA上CO I中278bp基因序列和亲缘关系较近的丝光绿 蝇和铜辱蝇mtDNA上CO II中635bp基因序列；用MEGA2．1软件包进 行序列分砰和构建系统发育树，并将分析所得的各苍蝇间的遗传距离值 与地理纬麦差值运用SPSS统计软件进行回归和相关分析，通过对具体量 化指标比较，客观地反映出各苍蝇间的遗传距离与地理纬度差值之间的 相互关系，克服了以往通过对进化树的聚类分化早晚来估计不同纬度地 理群体运薄结构的改变的主观性和粗略性。从基因水平进一步探讨嗜尸 性苍蝇荐荨的地区差异性，是法医昆虫学领域的一种新的尝试和探讨。 四川大学博士学位论文 四川大学博士学位论文 蔡继峰 法医病理学 摘 要 目的 研究呼和浩特地区夏秋季常见嗜尸性苍蝇生态群落组成与演替； 利用线粒体DNA(mtDNA)上细胞色素氧化酶辅酶I和1I(co I和COII) 以及16SrDNA中278bp和635bp以及513bp基因序列，鉴定嗜尸性苍 蝇的种类，解决依据形态学方法不能鉴定苍蝇卵的种类、很难鉴定幼虫、 蛹种类的难题，为法医鉴别嗜尸性苍蝇及其幼虫、蛹、卵种类提供依据。 同时，探讨嗜尸性苍蝇mtDNA基因序列分析所得的遗传距离与所处地理 纬度变化的相关与回归关系，为法医判断嗜尸性苍蝇所属地理种群，进 一步准确鉴定其种类、推断死亡时间和地点创造条件。 方法连续两年用观察法研究7～10月份，家兔、狗尸体、鸡、鱼内脏 等试验材料上的嗜尸性苍蝇生态群落组成与演替；随机采集放置在呼和 浩特及成都地区室外草地家兔尸体上的嗜尸性苍蝇、幼虫、蛹、苍蝇腹 中的卵。利用改进的小型昆虫DNA匀浆