脑神经血管单元体外模型的构建及梓葛冻干粉对其缺氧缺糖损伤的保护研究生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

—————————————旦』二———一IYlllltltlllIllll8lllllt8lllllllllllll4lllllllllllldl —————————————旦』二———一IYlllltltlllIllll8lllllt8lllllllllllll4lllllllllllldl舅皇曼舅舅罾甍曼皇曼曼曼皇皇曼!曼曼曼曼曼曼曼黑笪曼曼笪皇皇曼鼍曼曼鼍V口q 1月1 炒u 目录 中文摘要： ．．1 英文摘要： 4 前言月U舌 ．．，．．7 研究内容一“脑血管神经单元”体外模型的构建 ．8 实验一3种脑细胞的分离纯化和鉴定培养 ．．8 1．实验材料 8 1．1实验药品和试剂 8 1．2主要试剂的配制 9 1．3实验仪器 9 1．4实验动物 1 O 2．实验方法： ．．10 2．1．脑皮层神经元的原代培养与鉴定 lO 2．1．1脑皮层神经元的原代培养 lO 2．1．2．形态学观察 11 2．1．3细胞生长曲线绘制 “ ．∥点≮ 2．1．4．脑皮层神经元细胞的鉴定 12 2．2星形胶质细胞的体外培养和鉴定 ．12 2．2．1脑皮层神经元的原代培养 12 2．2．2．形态学观察 13 2．2．3．细胞生长曲线绘制 13 2．2．4．脑皮层星形胶质细胞的鉴定 13 2．3．血管内皮细胞的体外培养和鉴定 ．．14 2．3．2．形态学观察 14 2．3．3．细胞生长曲线绘制 14 2．3．4．脑皮层血管内皮细胞的鉴定 14 3．结果 ．1 6 3．1脑皮层神经元细胞培养结果 ．．16 3．2脑皮层星形胶质细胞培养结果 16 3．3脑皮层血管内皮细胞培养结果 ．．17 鱼 4．讨论 ．1 8 ‘缸， 5．小结 ．1 8 t 实验二3种脑细胞体外共培养及“脑神经血管单元”模型鉴定 ．23 两南人学硕十学何论文’ 两南人学硕十学何论文 ’ 1．实验材料 23 1．1实验药品和试剂 ．．23 懿 1．2主要试剂的配制 24 1．3实验仪器 25 1．4亏JJ物 ．26 2．实验方法 26 2．1 3细胞模型构建于细胞共培养池内 26 2．1．1神经元细胞的种植 26 2．1．2星型胶质细胞的种植 26 2．1．3脑微血管内皮细胞种植 27 2．2形态学观察 27 2．3模型的鉴定： ．27 2．3．1 4 h渗滤试验和常规HE染色初步鉴定细胞共培养模型： 27 2．3．2荧光素钠和HRP通透性试验测定细胞共培养模型通透性 ．28 2．3．3跨细胞间电阻(TEER)的测量 ．．28 2．3。4透射电镜检测精密连接 28 0 2．3．5丫-谷胺酰转肽酶(1，-glutamyl transpeptidase吖．GT)定量测定 ．．29 毒 2．3．6免疫细胞化学Pg—P的检测 ．29 2．4统计学分析 29 3．结果： ．30 j 3．1体外3种脑细胞共培养后细胞生长情况 30 3．2 4h渗漏试验检测细胞通透性结果 ．．30 3．3荧光素钠和HRP通透性试验测定细胞共培养模型通透性结果 ．30 3．4透射电镜检测血管内皮细胞l’日J紧密连接结果 31 3．5细胞跨膜电阻(TEER)测试结果 ．3 1 3．6 1，．谷氨酰胺转肽酶(丫．GT)活性测定结果： 32 3．7 Pg—P测定结果： 32 4．讨论 ．．32 5．小结 ．．33 研究内容二、梓葛冻干粉对缺氧缺糖损伤的脑神经血管单元的保护作用 ．34 1．实验材料 34 1．1实验药品和试剂配制 ．34 ’ 1．2主要试剂的配制 35 p妒， 1．2实验仪器 37 0 目 目 录 一； ’≯ 1．3动物 ．．38 0● 2．实验方法： 38 2．1缺氧缺糖再复氧模型的制作： ．38 2．2细胞电阻TEER的变化 。39 2．3 ZO．1免疫细胞化学染色 ．．39 2．4细胞Y-GT活力测定方法 ．．40 2．5细胞培养上清中TNF．0【和NGFB的检沏,U(ELISA方法) ．40 2．6细胞培上清NO和LDH以及细胞MDA和SOD的检测 ．．41 2．7细胞相关蛋白westerblot检测 41 3．结果： 44 3．1细胞电阻TEER结果 ．44 3．2血管内皮细胞膜ZO—l蛋白免疫细胞化学染色 44 3．