食品微生物学检验..pptVIP

食品微生物学检验 徐州质检所 李美桃 基本内容 菌落总数测定 大肠菌群测定 霉菌和酵母菌计数 罐头食品商业无菌的检验 乳酸菌饮料中乳酸菌检验 涂抹试验和空降试验 菌落总数测定 定义 食品检样经过处理,在一定条件下培养后(如培养基成分,培养温度和时间,PH,需氧性质等),所得1ml(g)检样中所含菌落的总数.本方法规定的培养条件下所得结果，只包括一群在营养琼脂上生长发育的嗜中温需氧的菌落总数。 意义 菌落总数主要作为判定食品被污染程度的标志,也可以观察细菌在食品中繁殖的动态,以便对被检样品进行卫生学评价时提供依据. 菌落总数测定 cfu：colony-forming units 菌落形成单位，一个细菌在平板计数琼脂培养基上生长形成肉眼可见的菌落。 菌落总数测定 菌落总数测定 测定过程中的一些要求和规定 (一) 所用器皿和稀释液 检验中所用器皿必须是完全灭菌的,在灭菌前应洗刷干净,不得残留抑菌物质. 用作样品稀释的液体,每批都要有空白对照. 检样的稀释液可以用灭菌生理盐水或蒸馏水,最好使用磷酸缓冲液. 菌落总数测定 测定过程中的一些要求和规定 (二)检样稀释 检样稀释时应以无菌手续称取(或量取)有代表性的样品,经充分振摇混匀后作成1:10的稀释液. 根据检样的具体情况,做几个适当的10倍递增稀释液.注意每递增稀释一次,必须换一支灭菌吸管. 稀释过程中要注意无菌操作,防止在稀释过程中受到外界的污染. 菌落总数测定 测定过程中的一些要求和规定 (三) 平板接种和培养 将稀释液加入灭菌平皿内时,应选择2-3个适宜稀释度,在作10倍递增稀释的同时,吸取1ml加入平皿内. 营养琼脂应预先加热融化,保温于45℃左右的恒温水浴中待用. 检液加入平皿后,应在20分钟内倾入营养琼脂,并立即混合均匀. 琼脂凝固后,应在数分钟内翻转培养,这样可以避免菌落蔓延生长. 为了控制污染,在检验的同时,于工作台上打开一块琼脂平板,其暴露的时间应与该检样从制备,稀释到加入平皿时所用的最长时间相当,然后与加有检样的平皿一并置于温箱内培养. 培养温度应根据食品种类而定. 菌落总数测定 测定过程中的一些要求和规定 (四) 对照试验 加入平皿内的检样稀释液,有时带有食品颗粒.为了避免混淆,可做一检样稀释液与琼脂混合的平皿,不经培养,而于4℃环境中放置,以便在计数时做对照. 为了防止检样中食品颗粒与菌落混淆,也可在已溶化而保温于45 ℃水浴内的琼脂中,每100ml加入1ml 0.5%氯化三苯四氮唑(TTC)水溶液.培养后,如系食品颗粒,不见变化,如为细菌,则生成红色菌落. 菌落总数测定 菌落计数 选取菌落数在30—300之间的平板作为菌落总数测定标准.一个稀释度使用两个平板,应采用两个平板平均数. 菌落数的报告 菌落数在100以内时,按其实有数报告;大于100时,采用两位有效数字,在两位有效数字后面的数值,以四舍五入方法计算.为了缩短数字后面的零数,也可以用10的指数来表示. 菌落总数测定 菌落总数测定 注意事项: 如果稀释度大的平板上菌落数反而比稀释度小的平板上菌落数高,则系检验过程中的差错,也可能是抑菌剂混入样品所致,均不可用作菌落计数的依据. 其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数,若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,则可计算半个平板后乘2以代表全皿菌落数. 菌落总数测定 注意事项: 平板内如有链状菌落生长时(菌落之间无明显界限),若仅有一条链,可视为一个菌落;如果有不同来源的几条链,则应将每条链作为一个菌落计. 如果所有平板上都菌落密布,不要用多不可计作报告,而应在稀释度最大的平板上任意数2cm2中的菌落数,然后换算到整个平皿,再乘以稀释倍数报告. 基本内容 菌落总数测定 大肠菌群测定 霉菌和酵母菌计数 罐头食品商业无菌的检验 乳酸菌饮料中乳酸菌检验 涂抹试验和空降试验 大肠菌群测定 术语和定义 大肠菌群系指一群能发酵乳糖,产酸产气,需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌.该菌主要来源于人畜粪便,故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量,推断食品中有否污染肠道致病菌的可能. 食品中大肠菌群数系以100ml(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示. 大肠菌群测定 检验方法 乳糖发酵实验.以无菌操作采取样品,作几个10倍递增稀释液,选取3个适宜的稀释度接种乳糖胆盐发酵管,每个稀释度接种三管,36±1℃培养24±2h. 若都不产气,可报告为大肠菌群阴性,如有产气者,按下列程序进行. 分离培养. 将产气的发酵管分别转种在伊红美蓝琼脂平板上, 36±1℃培养24±2h,取出后观察菌落形