不同条件保存卵巢对小鼠gv期卵母细胞染色质构型及组蛋白表观修饰的影响动物遗传育种与繁殖专业论文.docxVIP

2．9卵母细胞Sr2+激活和胚胎培养 2．9卵母细胞Sr2+激活和胚胎培养 。20 2．10卵母细胞核内组蛋白及Fas蛋白免疫荧光染色 2l 2．11 Hoechst33342荧光染色检测颗粒细胞凋亡 22 2．12 Western Blot检测颗粒细胞FasL表达 23 2．12．1 westem blot试剂及溶液 23 2．12．2壁颗粒细胞蛋白的提取 ．23 2．13．3 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 23 2．12．4抗原抗体的结合及显色 25 2．13数据分析 25 3结果与分析 26 3．1不同条件保存卵巢前后卵母细胞染色质构型分类 ．26 3．2不同条件保存卵巢对卵母细胞染色质构型转变的影响 ．28 3．3活细胞工作站下观察卵母细胞异常染色质构型转变的过程 ．28 3．4不同条件保存卵巢对卵母细胞发育能力的影响 。30 3．5不同条件保存卵巢对卵母细胞组蛋白修饰的影响 ．31 3．5．1不同条件保存卵巢对卵母细胞组蛋白乙酰化水平的影响 31 3．5．2不同条件保存卵巢对卵母细胞组蛋白甲基化水平的影响 35 3．5．3不同条件保存卵巢对卵母细胞组蛋白磷酸化水平的影响 ．．36 3．6不同条件保存卵巢对颗粒细胞凋亡、FasL表达水平的影响 ．37 3．6．1不同条件保存卵巢对颗粒细胞凋亡的影响 37 3．6．2不同条件保存卵巢对颗粒细胞FasL表达水平的影响 ．39 3．7不同条件保存卵巢对卵母细胞Fas表达水平的影响 ．39 4讨论 ． 。41 4．1不同条件保存卵巢对卵母细胞染色质构型转变的影响 ．41 4．2不同条件保存卵巢对卵母细胞发育能力的影响 ．42 4．3不同条件保存卵巢对卵母细胞组蛋白表观修饰水平的影响 ．43 4．4不同条件保存卵巢对颗粒细胞凋亡的影响 ．46 4．5不同条件保存卵巢对颗粒细胞FasL表达水平和卵母细胞Fas表达水平的影响 47 5结1呛 49 参考文献 50 万方数据 致谢 致谢 59 作者简介以及发表论文 60 万方数据 山东农业大学硕士学位论文中文摘要 山东农业大学硕士学位论文 中文摘要 研究表明，在成熟前NSN构型的卵母细胞要转变成SN构型，且SN型卵母细胞比 NSN型卵母细胞发育能力强，但其机理尚不清楚。并且GV期卵母细胞核心组蛋白修饰 变化的研究结果与染色质构型转变和基因活动变化相矛盾。因此，进一步研究GV期卵 母细胞染色质构型转变的调控机制及其与组蛋白表观修饰和发育能力的关系，对于了解 卵母细胞成熟机理、改善成熟质量和提高发育能力具有重要意义。我们以18．19日龄的 雌性小鼠为动物模型，摘除卵巢后在体外37。C和390C分别各保存1h和2h，使染色质 构型与相关组蛋白修饰和发育能力进行脱钩，进一步研究体外保存卵巢对小鼠GV期卵 母细胞染色质构型、卵母细胞发育能力以及组蛋白表观修饰(乙酰化、甲基化、磷酸化) 的影响。 研究结果表明： (1)体外保存卵巢以后卵母细胞染色质凝集程度加重，且异常染色质构型增多； (2)370C保存1h后，卵母细胞发育能力为五组中最高。相同温度下保存，随保 存时间延长，发育能力下降；保存相同时间，温度越高，发育能力越差； (3)同一温度下随保存时间延长，组蛋白(H3K14、H4K12、H4K16)乙酰化水 平、组蛋白(H3K4、H3K9)甲基化水平以及组蛋白磷酸化水平(H3S10)逐渐下降， 与发育能力变化趋势一致；保存相同时间，温度越高各种组蛋白表观修饰水平越低，与 卵母细胞发育能力变化趋势一致； (4)随保存温度的升高和保存时间的延长，颗粒细胞凋亡程度加重，FasL表达水 平相应升高； (5)随保存温度的升高和保存时间的延长，卵母细胞Fas表达水平相应升高。 由上述结果我们可以知道体外不同条件保存卵巢以后卵母细胞染色质凝集现象加 重，异常染色质构型增多：体外不同条件保存卵巢以后卵母细胞发育能力下降，且发育 能力与组蛋白表观修饰水平趋势一致；体外不同条件保存卵巢过程中，在颗粒细胞与卵 母细胞之间Fas／FasL信号通路起到了一定的作用，Fas／FasL蛋白少量表达促进卵母细胞 发育，大量表达抑制卵母细胞发育；另外，颗粒细胞轻度凋亡促进卵母细胞发育，重度 凋亡抑制卵母细胞发育。 关键词：卵巢保存；染色质构型；组蛋白修饰；卵母细胞；胚胎发育 万方数据 卵巢不同保存条件对GV期卵母细胞染色质构型及组蛋白表观修饰的影响The 卵巢不同保存条件对GV期卵母细胞染色质构型及组蛋白表观修饰的影响 The Effects of Ovary Preservation in Different Conditions Oil GV Chromatin Configuration and Histone Epigenetic Modifications of Mic