附属基因调节系统agrⅰ型对表皮葡萄球菌生物膜形成调节关系的研究临床检验诊断学专业论文.docxVIP

复旦大学博士研究生毕业论文 复旦大学博士研究生毕业论文 表葡菌agfd型基因对生物膜形成调节关系研究 博士学位论文中文摘要 agr—I型对表皮葡萄球菌生物膜形成调节关系的研究 表皮葡萄球菌曾被认为是皮肤、粘膜的汇常菌群，近几年来，它已成为医 院内感染的最重要的病原体之一。表皮葡萄球菌产生很少的组织损伤性酶和毒 素，致病机理与其能黏附在高分子材料表面并生成生物膜有关。研究调节表皮葡 萄球菌生物膜形成的相关基因，阐明表皮葡萄球菌生物膜形成的调节机制是研究 预防和治疗由表皮葡萄球菌引起的插管等留置物相关感染的关键。 葡萄球菌的agr是最重要的毒力因子调节系统，负责对毒力因子生长阶段依 赖性的调节。目前人们已逐渐认识到表皮葡萄球菌的agr基因在其致病中的重要 性，如agr可以下调和生物膜形成最初阶段有关的重要的结构基因一atlE的表达； agr可以产生一种转录后修饰的多肽信息素，信息素能活化自身的agl,但能抑 制非自身的agr等等。但与金黄色葡萄球菌相比，目前对表皮葡萄球菌的agr 基因功能研究才刚刚开始，许多疑问尚待解决。本研究目的是对表皮葡萄球菌 agr基因的功能、agr基因与表皮葡萄球菌生物膜形成之间的关系、agr基因对 生物膜形成调节的机制等进行较为全面的研究，最终希望明确agr基因与表皮葡 萄球菌致病性之间的关系，为进一步研究如何治疗临床上顽固的表皮葡萄球菌感 染及药物的合理应用提供新的思路。 (1)我国表皮葡萄球菌agr多态性分布情况 agr在葡萄球菌中呈多态性。对金黄色葡萄球菌的研究认为agr亚型与其所 致疾病之间存在相关性。本文通过特异性PCR及酶切鉴定、序列测定的方法对 不同来源的表皮葡萄球菌进行亚型分布的研究，结果表明病原性表皮葡萄球菌以 agr—I型为主，特别是导管和血液来源的表皮葡萄球菌agr．I型占有比例最高， 临床资料也提示与导管植入和菌血症有关的表皮葡萄球菌感染是临床上最为严 重的表皮葡萄球菌感染类型。正常菌株以agr．II型为主。对表皮葡萄球菌agr基 因及其亚型分布的研究，对接下来研究表皮葡萄球菌agr-I型基因功能、agr-I 型基因与表皮葡萄球菌生物膜形成之间的关系等方面将起着十分重要的作用。 (2)表皮葡萄球菌agr-I型阴性突变株的建立 表皮葡萄球菌agr与生物膜形成有关的重要结构基因之间，目前己发现表皮 葡萄球菌agr基因可以下调与生物膜形成最初阶段有关的重要的结构基因atie 复旦大学博士研究生毕业论文 复旦大学博士研究生毕业论文 表葡菌agr-I型基因对生物膜形成调节关系研究 (自溶素基因，参与细菌在疏水表面的最初附着)的表达，表皮葡萄球菌留r 基因与其它结构基因之间的关系均尚未明了。由于agT阴性自然突变株与agr 阳性野生株之间缺乏除钟基因以外相同的遗传背景，使得我们无法对表皮葡萄 球菌agr功能做出真实的判断。目前我们只能获得可以用于转化的昭卜I型表皮 葡萄球菌，同时研究表明病原性表皮葡萄球菌以agr-I型为主。基于上述原因， 本实验室通过同源重组方法构建表皮葡萄球菌gtgr-I型阴性突变株，使agI-I 型基因被大部分剔除掉。从而获得除agT-I型基因以外相同遗传背景的突变株与 野生株。为研究表皮葡萄球菌89T-I型基因在调节其生物膜形成、毒力相关蛋白 表达中的作用，从而最终明确agr-I型基因与表皮葡萄球菌致病性的关系等方面 提供良好的实验前提。 (3)agT-I型基因对表皮葡萄球菌生物膜形成能力及致病力的影响 为验证89l-I型基因与生物膜形成的关系，采用半定量生物膜形成实验检测 89T-I型阴性突变株与野生株生物膜形成能力的变化。结果表明agf-I型阴性突 变株生物膜形成能力明显高于蟛卜I型阳性野生株。扫描电子显微镜的结果也从 形态上证实了帮r-I型基因突变前后生物膜形成的差异。为阐明agT-I型阴性 突变株与agr-I型阳性野生株致病力的变化，分别将891-I型阴性突变株与gtgl- I型阳性野生株进行了动物实验。大鼠中央静脉插管感染实验显示，与础弘I型 阳性野生株相比，agi-I型阴性突变株引起实验动物感染率明显增高，从被感染 动物每克肝脏、肾脏和血液组织中检测到的细菌数远远高于agl-I型阳性野生株 攻击组动物相应组织中细菌检出数。以上结果提示a92-1型阴性突变株黏附能 力、致病力明显增强。证明agF-I型基因可以下调表皮葡萄球菌生物膜的形成， 是生物膜形成的抑制因子。 (4)agT-I型基因对生物膜形成有关的重要结构基因及蛋白的调节作用 以上研究表明agT-I型基因可以下调表皮葡萄球菌生物膜的形成，是生物膜 形成的抑制因子。近来的研究发现agr基因可以通过调节af饱和6．毒素的表达 来下调生物膜形成。生物膜的形成受控于多种基