甲基磺酸乙酯诱变选育竹红菌甲素高产菌株-生物加工过程.PDF

第 １２卷第２期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１２ Ｎｏ２ ２０１４年３月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｍａｒ ２０１４ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１４０２００５ 甲基磺酸乙酯诱变选育竹红菌甲素高产菌株 杨珠英，潘魏松，聂　 云，罗　 晗，王剑文 （苏州大学 医学部 药学院，苏州 ２１５１２３） 摘　 要：以从短穗竹（Ｂｒａｃｈｙｓｔａｃｈｙｕｍ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒｕｍ）茎秆中分离获得的竹黄菌（Ｓｈｉｒａｉａ ｓｐＳ８）菌株为出发菌株，以 ０５％～２５％甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）处理竹黄菌悬浮孢子１０～３０ ｍｉｎ，结合平板初筛和高效液相色谱（ＨＰＬＣ）分析进 行复筛。 经诱变筛选得到高产菌株 １０ ５，发现其竹红菌甲素产量达到２６８ ｍｇ／ Ｌ，与原始出发菌株相比提高了 ４６４％，且遗传稳定性良好，具有较高的医药及工业应用价值。 关键词：甲基磺酸乙酯；竹红菌素；选育；竹黄菌 － － － 中图分类号：Ｑ７８４　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１４）０２ ００２４ ０４ Ｂｒｅｅｄｉｎｇ ｏｆ Ｓｈｉｒａｉａ ｓｐｓｔｒａｉｎ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈ⁃ｙｉｅｌｄ ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ ｂｙ ＥＭＳ ｍｕｔａｔｉｏｎ ＹＡＮＧＺｈｕｙｉｎｇ，ＰＡＮ Ｗｅｉｓｏｎｇ，ＮＩＥ Ｙｕｎ，ＬＵＯ Ｈａｎ，ＷＡＮＧＪｉａｎｗｅｎ （Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｓｏｏｃｈｏｗ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｕｚｈｏｕ ２１５１２３，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｎｅ ｉｓｏｌａｔｅｄ ｓｔｒａｉｎ Ｓｈｉｒａｉａ ｓｐ Ｓ８ｆｒｏｍ ｔｈｅ ｓｔｅｍｓ ｏｆ Ｂｒａｃｈｙｓｔａｃｈｙｕｍ ｄｅｎｓｉｆｌｏｒｕｍ ｗａｓｂｒｅｅｄｉｎｇ ｃａｎｄｉｄａｔｅｓｆｏｒ ｈｉｇｈｅｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ Ａ （ＨＡ） ｂｙ ｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ （ＥＭＳ） ｍｕｔａｔｉｏｎ． ＥＭＳ ａｔ ０５％ ｔｏ ２５％ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｒｅａｔ ｔｈｅ ｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ ｓｐｏｒｅｓ ｆｏｒ １０ ｍｉｎ ｔｏ ３０ ｍｉｎＴｈｒｏｕｇｈ ｔｈｅ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｍｅｔｈｏｄｓｗｉｔｈ ｔｈｅ ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙ ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ ｏｎ ｔｈｅ ｄｉａｍｅｔｅｒ ｏｆ ｔｈｅ ｒｅｄ ｐｉｇｍｅｎｔ ｒｉｎｇ ａｎｄ ＨＰＬＣ，ｔｈｅ ｍｕｔａｎｔ １０⁃５ ｗｉｔｈ ｈｉｇｈｅｒ ＨＡ ｙｉｅｌｄ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｖｅｒｉｆｉｅｄ ｔｏ ｂｅ ｇｅｎｅｔｉｃａｌｌｙ ｓｔａｂｌｅＨＡ ｙｉｅｌｄｂｙ ｍｕｔａｎｔ １０⁃５ｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄｂｙ４６４％ｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌ ｓｔｒａｉｎＴｈｅＥＭＳｍｕｔａｎｔ ｈａｄ ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ａｎｄ ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ ｉｍｐｏｒｔａｎｃｅ ｆｏｒ ＨＡ Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ：ｅｔｈｙｌ ｍｅｔｈａｎｅ ｓｕｌｐｈｏｎａｔｅ；ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ；ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ；Ｓｈｉｒａｉａ ｓｐ 　 　 竹红菌素（ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ）属于苝醌类化合物，包 红菌甲素目前尚未实现大规模生产，其应用也受到 括竹红菌甲素（ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ Ａ，简称ＨＡ）、乙素、丙素 了很大限制。 高产菌株的筛选有利于实现竹红菌 和丁素４种化合物，竹红菌甲素是其中的主要成分， 素