载LOX-siRNA靶向超声微泡的制备及其对大鼠-第三军医大学学报.PDFVIP

　ｈｔｔｐ：／／ａａｍｍｔ．ｔｍｍｕ．ｅｄｕ．ｃｎ　　 　　　　　　第三军医大学学报，２０１７，３９（２４） ２３５９ ＤＯＩ：１０．１６０１６／ｊ．１０００５４０４．２０１７０８０３２ 载ＬＯＸ１ｓｉＲＮＡ靶向超声微泡的制备及其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用 １ ２ １ 陈　霞 ，肖　煦　　（５１０６００广州，南方医科大学第三附属医院心内科超声室 ；５１０２２０广州，南方医科大学珠江医 ２ 院超声诊断科 ） 　　［摘要］　 目的　构建载血凝素样氧化低密度脂蛋白受体 １（ｌｅｃｔｉｎｌｉｋｅｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙ ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ１，ＬＯＸ１）ｓｉＲＮＡ靶向超声微泡，研究其对大鼠动脉粥样硬化斑块的生物学作用。 方法　薄膜水化超声乳化法构建载 ＬＯＸ１ｓｉＲＮＡ纳米级超声微泡（ｎａｎｏｂｕｂｂｌｅｓ，ＮＢｓｓｉＲＮＡ）。从 Ｗｉｓｔａｒ大鼠体内分离、培养动脉平滑肌细胞（ｖａｓｃｕｌａｒｓｍｏｏｔｈｍｕｓｃｌｅｃｅｌｌｓ，ＶＳＭＣｓ）。通过凝胶迁移阻滞 实验与ｓｉＲＮＡ细胞内化实验验证超声微泡可运载ｓｉＲＮＡ进入靶细胞内；ｑＲＴＰＣＲ及Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测 ＬＯＸ１的ｍＲＮＡ和蛋白表达水平；油红Ｏ染色观察细胞内脂质聚集情况。构建Ｗｉｓｔａｒ大鼠动脉硬化模 型，实验组经鼠尾静脉注射含有ＬＯＸ１ｓｉＲＮＡ的ＮＢｓｓｉＲＮＡ微泡１００ ｇ，并使用超声仪照射。治疗１５ｄ μ 后，取标本ＨＥ染色后与对照组对比动脉硬化斑块病变程度；免疫组化法检测斑块组织中ＬＯＸ１表达情 况。结果　凝胶迁移阻滞实验结果显示，证实 ＮＢｓ与ｓｉＲＮＡ结合成功。激光共聚焦显微镜观察证实 ＮＢｓ可通过超声照射介导ｓｉＲＮＡ内化入 ＶＳＭＣｓ之中。ｑＲＴＰＣＲ及 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ实验结果显示实验组 ＶＳＭＣｓＬＯＸ１ｍＲＮＡ及蛋白表达水平降低（Ｐ＜０．０１）。油红 Ｏ染色显示实验组细胞泡沫化较 ｏｘＬＤＬ 组减弱。组织标本ＨＥ染色表明实验组大鼠动脉斑块病变中内膜增厚、中膜萎缩及炎细胞浸润情况较 对照组减轻；免疫组化实验结果显示，实验组动脉斑块中ＬＯＸ１表达水平较各对照组降低（Ｐ＜０．０１）。 结论　成功制备能够有效运载ＬＯＸ１ｓｉＲＮＡ的超声微泡，体内外实验证实该微泡可以在超声辐照下内 化入靶细胞内部，下调ＬＯＸ１表达，减少泡沫细胞形成，降低动脉硬化斑块病变的严重程度。 　　［关键词］　动脉硬化斑块；超声微泡；血凝素样氧化低密度脂蛋白受体１；ｓｉＲＮＡ 　　［中图法分类号］　Ｒ５４３．５；Ｒ９６５；Ｒ９８１ ［文献标志码］　Ａ ＰｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｔａｒｇｅｔｅｄＬＯＸ１ｓｉＲＮＡｌｏａｄｅｄｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅｓａｎｄｔｈｅｉｒ ｅｆｆｅｃｔｏｎａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｔｉｃｐｌａｑｕｅｉｎｒａｔｓ １ ２ １ ＣＨＥＮＸｉａ，ＸＩＡＯＸｕ（ＵｌｔｒａｓｏｕｎｄＲｏｏｍ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＣａｒｄｉｏｌｏｇｙ，ＴｈｉｒｄＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２ ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，５１０６００； ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＵｌｔｒａｓｏｕｎｄｄｉａｇｎｏｓｉｓ，ＺｈｕｊｉａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ， ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，５１０２２０，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｌｅｃｔｉｎｌｉｋｅｏｘｉｄｉｚｅｄｌｏｗｄｅｎｓｉｔｙｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎｒｅｃｅｐｔｏｒ１（ＬＯＸ１） ｓｉＲＮＡｌｏａｄｅｄｕｌｔｒａｓｏｕｎｄｍｉｃｒｏｂｕｂｂｌｅｓ，ａｎｄｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｉｒｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｆｕｎｃｔｉｏｎ