基于百草枯和代森锰诱导的帕金森病大鼠模型的纹状体电生理学研究-环境科学专业论文.docxVIP

摘要帕金森病(Parkinson’S 摘要 帕金森病(Parkinson’S disease，PD)是一种常见的神经退行性疾病。病因学 研究表明PD发病与基因表达异常和环境因素作用相关联，但仅10％为家族 性PD病例，而90％的原发性PD则由环境因子所诱发。研究显示部分农药 暴露或接触与PD发病存在关联，我们研究室前期工作也表明农药鱼藤酮 (rotenone)、百草枯(Paraquat，PQ)和代森锰(Maneb，MB)暴露与PD关系 密切。另外由于农药常常被重叠施用，导致局部环境中两种以上农药可能同时存 在，因而农药的联合神经毒性效应尚需动物暴露实验证明。本文以SD大鼠为 模式动物，观察PQ单独及与MB联合慢性暴露对动物运动行为的影响，检测 神经毒性效应引起黑质神经元的变化，以此尝试建立PQ／MB诱导的PD大鼠 模型。已有的研究表明PD运动调节功能障碍源于黑质多巴胺能神经元退变， 并与基底神经节电生理活动关系密切，但研究多集中在苍白球和底丘脑，而相对 于正常动物而言PD动物纹状体神经元电活动及DA受体是否发生变化尚较 少涉及。本文在PQ／MB诱导的PD模式动物上进一步探讨纹状体神经元自发 电活动的变化，并通过微电泳多巴胺D1或D2受体选择性激动剂，观察DA 两种受体敏感性变化及与PD的关联。 主要结果如下： 1．PQ(10 mg／kg)单独及与MB(30 mg／kg)联合暴露6周引发大鼠 的运动行为及黑质神经元病理学变化。行为学检测结果显示，大鼠从斜板上滑落 的次数与对照组和同组暴露前相比均显著增多，在网格上的移动延迟时间均显著 性延长。开阔实验中，暴露组大鼠的探洞次数较暴露前显著减少，联合暴露组大 鼠直立时间较对照组和暴露前均显著缩短，与对照组和暴露前相比，大鼠静止型 蹲坐时间显著增加而跨格次数明显增多。与PQ单独暴露相比，PQ和MB联 合暴露后检测到的运动行为障碍有所加重。病理学结果显示，PQ单独及与MB 联合暴露使得黑质致密部神经元发生进行性受损，神经元数量分别缺失了43％ 和71％。与大鼠运动行为变化一致，PQ与MB的联合较PQ单独暴露产生 更严重的黑质神经元损伤效应。 2．PQ单独及与MB联合暴露后，大鼠纹状体神经元自发放电的型式有所 改变，呈规则单脉冲放电神经元增加，不规则单脉冲放电神经元减少，且联合暴 露组动物混合簇状放电神经元比例较对照组和PQ组均显著性增加。单独及联 露组动物混合簇状放电神经元比例较对照组和PQ组均显著性增加。单独及联 合暴露后纹状体神经元自发放电频率较对照组显著提高，其中1 Hz以下的低频 放电神经元显著减少，而10 Hz以上的高频放电神经元显著增多。且PQ与MB 联合暴露使得纹状体中等多棘投射神经元、大胆碱能和快放电的中间神经元比例 分布发生一定变化，且各神经元电活动均显著增强。 3．对大鼠纹状体神经元微电泳D1受体激动剂SKF38393或D2受体激 动剂LYl71555后，纹状体神经元自发放电均可产生兴奋或抑制效应。进一步 统计分析发现，激活D1受体可使PQ与MB联合暴露组纹状体神经元较对照 组产生更强的抑制效应，而激活D2受体则产生更弱的兴奋效应。微电泳 SK．F38393和LYl71555还使得产生兴奋效应的纹状体神经元放电波形发生变 化，且两者在暴露组和对照组所产生的影响效应显示了不同的特征。 上述结果表明： 1．PQ单独及与MB慢性联合暴露均能诱发大鼠产生震颤、肌僵直、迟缓、 运动减少等典型的类PD行为症状，使得黑质神经元发生进行性受损和缺失这 一典型PD病理学变化。另外，行为学和病理学检测均显示PQ与MB联合 暴露毒性效应较PQ单独暴露效应强，表明二者具有一定协同神经毒性作用。 2．PQ单独及与MB联合暴露使得大鼠纹状体神经元自发电活动增强，纹 状体内中等多棘投射神经元、大胆碱能和快放电的中间神经元电活动均呈现加强 趋势，表明投射神经元和中间神经元的电生理活动均与PD运动功能障碍相关 联。 3．局部激活纹状体D1或D2受体，实验在PQ／MB诱发的模式动物和对 照组动物上观察到对纹状体神经元电活动的差异性影响效应。在模式动物上，激 活D1受体诱发更强的抑制效应，而激活D2受体则产生更弱的兴奋效应，表 明D1和D2受体敏感性出现不同的变化。这就进一步支持纹状体D1和D2 受体功能分别与基底神经节直接通路和间接通路功能关联，也表明与D1和D2 受体关联的直接通路和间接通路的不平衡是导致PD运动调节功能障碍的重要 原因。 本研究工作从行为学和病理学角度探讨了PQ及与MB联合暴露对大鼠 的神经毒性效应，证实了PQ具有诱发PD的神经毒性效应，MB具有一定 II 的协同PQ的毒性作用。通过在体单细胞胞外记录结合微电泳技术，结果表明 的协同PQ的毒性作用。通过在体单细胞胞外记录结合微