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木糖还原酶基因在大肠杆菌中活性表达-华侨大学学报自然科学版
29 3 ( ) Vol. 29 No . 3
2008 7 Journal of H uaqiao University ( Natural Science) Jul. 2008
: 000-50 3( 2008) 03-0383-04
王晓霞, 方柏山, 李雯君
( , , 36202 )
: ( PCR) , ( Cand ida shehatae) DNA
(Xylose Reduct ase, XR) , . 6 h XR ,
20% . -B- D-( IPT G) ,
, 232. 38 Lkat # g- , IPT G
206.04 Lkat # g- .
: ; ; ; ;
: T Q 923; Q 789 : A
( ) , , -
[ ]
, . ,
, , .
[ 2-3]
, . ,
, .
, .
, , ,
[ 4] [ 3]
, . ,
, , .
( C. shehat ae CICC 766) ( XR) xr ,
, -B-D-( IPT G)
, E. col i .
1
1. 1
C. shehatae CICC 766( ) , E . col i DH5A (
) , pET-22b( ) ; E. c ol i BL2
( DE3) plysS( E. col i , ) ; T aqTM DNA
NdeÑBamH Ñ(TA KARA ) ; T4 DNA ( PROMEGA ) ;
( OMEGA BIO-T EK ) ; GeneRulerTM Ladder Mix(
) ; I( N ADH, AM RESCO ) . ,
.
1. 2
: 2007- 0-08
: ( 98 -) , ; : ( 957-) , , , , . E-
mail:fangbs@ hqu. edu. cn.
: ( C96068)
384 ( ) 2008
. 2. 目的基因的克隆及序列分析 ( NCBI) C. she hatae
CS05 , .
: 5.- AT CCA TAT GAGCCCAA GCCCAATT CC-3. ( NdeÑ) .
: 5.- CCCGGAT CCAACAAGCACGCT TAAACGA-3. ( BamH Ñ) .
C. shehatae DNA , PCR 1 : 94 e 4 min, 94 e
min, 54 e min, 72 e 2 min( 30 ) , 72 e 0 min.
. 2. 2 表达载体 pET 22-xr 的构建及在E. col i 中的表达 PCR %
, PCR pET-22b NdeÑBam H Ñ, T 4 DNA
. E. col i DH5A, NdeÑBamH Ñ.
pET 22-xr E. c ol i , 37 e A 600 0. 6~ 0. 8
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