负载富血小板纤维蛋白的新型水凝胶对Bmscs体外成软骨-江苏大学.PDF

第２８卷第４期 江 苏 大 学 学 报（医学 版） Ｖｏｌ．２８ Ｎｏ．４ 　 ２０１８年７月 　 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＪｉａｎｇｓｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＭｅｄｉｃｉｎｅＥｄｉｔｉｏｎ） Ｊｕｌ．２０１８ 　 　 　 　 　 　 负载富血小板纤维蛋白的新型水凝胶对 ＢＭＳＣｓ体外成软骨分化的影响 １，２ １，２ １ １ ３ ２ 陈星光 ，邹承达 ，宿广昊 ，张亚 ，陆敏华 ，王晓东 （苏州大学附属儿童医院１．儿科临床研究院，２．骨科 江苏 苏州２１５０２５；３．苏州市独墅湖医院骨科，江苏 苏州２１５０２５） ［摘要］　目的：探究负载富血小板纤维蛋白（ｐｌａｔｅｌｅｔｒｉｃｈｆｉｂｒｉｎ，ＰＲＦ）的新型水凝胶对骨髓间充质干细胞（ｂｏｎｅ ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌｓｔｅｍｃｅｌｌｓ，ＢＭＳＣｓ）体外成软骨分化的影响。方法：配制体积比为６∶１∶１的２％壳聚糖／５６％ 甘油 β 磷酸钠／０．１％京尼平混合液，置于３７℃恒温水浴箱后观察其成胶时间；通过一次离心法（１２００ｒ／ｍｉｎ，１２ｍｉｎ）制备 ＰＲＦ，将ＰＲＦ冻干研磨成粉后加入上述混合液，置于３７℃制备负载ＰＲＦ的新型水凝胶。接种ＢＭＳＣｓ于水凝胶表 面，培养１、３、７ｄ后通过二乙酸荧光素（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎｄｉａｃｅｔａｔｅ，ＦＤＡ）荧光染色观察其增殖情况；再将细胞接种于２４孔 板，分为负载ＰＲＦ的新型水凝胶组（ＰＲＦ组）、壳聚糖水凝胶组（壳聚糖组）以及单纯诱导组，分别添加适量材料后 进行成软骨诱导，第２周结束时每组取１２孔分别进行ＨＥ染色、番红Ｏ固绿染色、阿利新蓝染色、兔 型胶原免疫 Ⅱ 组化染色观察软骨分化情况；其余细胞诱导至第４周结束，阿利新蓝比色法和ＥＬＩＳＡ法检测每周收集上清液中糖 胺聚糖及 型胶原含量。结果：壳聚糖／甘油磷酸钠／０．１％京尼平混合液在３７℃下约８ｍｉｎ能够成胶；ＦＤＡ荧 Ⅱ β 光染色显示ＢＭＳＣｓ在水凝胶表面增殖良好；４种染色结果显示ＰＲＦ组均呈阳性，壳聚糖组和单纯诱导组呈弱阳性； ３组上清液均含有糖胺聚糖和 型胶原，ＰＲＦ组分泌量在４周内均显著高于其他两组（Ｐ均＜０．０５）。结论：ＢＭＳＣｓ Ⅱ 能够在负载ＰＲＦ的新型水凝胶表面生长、增殖，细胞相容性较好；该水凝胶能在一定程度上促进 ＢＭＳＣｓ成软骨 分化。 ［关键词］　骨髓间充质干细胞；壳聚糖；水凝胶；软骨组织工程；富血小板纤维蛋白 ［中图分类号］　Ｒ３２９　　［文献标志码］　Ａ　　［文章编号］　１６７１－７７８３（２０１８）０４－０２９１－０６ ＤＯＩ：１０．１３３１２／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１７７８３．ｙ１８００８２ ［引用格式］陈星光，邹承达，宿广昊，等．负载富血小板纤维蛋白的新型水凝胶对ＢＭＳＣｓ体外成软骨分化的影响 ［Ｊ］．江苏大学学报（医学版），２０１８，２８（４）：２９１－２９６． Ｅｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｎｅｗｈｙｄｒｏｇｅｌｓｌｏａｄｅｄｗｉｔｈｐｌａｔｅｌｅｔｒｉｃｈｆｉｂｒｉｎｏｎ ｃｈｏｎｄｒｏｇｅｎｉｃｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎｏｆＢＭＳＣｓ １，２ １，２ １ １ ３