甲状旁腺激素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响-内科学专业论文.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 甲状旁腺激素对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响 摘 要 目的： 1.通过对大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs） 的分离培养与鉴定，为实验提供了合格的细胞来源。 2.探讨不同浓度甲状旁腺激素1-34（PTH1-34）对大鼠BMSCs成骨分化的影响及 其可能的作用机制，进而为甲状旁腺激素治疗骨质疏松症提供实验基础与依据。 方法： 1.通过贴壁培养的方法分离培养骨髓间充干细胞并且对其进行鉴定。 2.不同浓度 PTH1-34（0、10-10、10-9、10-8mol/L）间断作用于 BMSCs，以 48 个 小时作为一个周期，前 6 个小时加药，后 42 个小时不加药，采用 MTT 法对 BMSCs 的增殖情况进行检测。 3.不同浓度 PTH1-34（0、10-10、10-9、10-8mol/L）间断作用于 BMSCs，以 48 个 小时作为一个周期，前 6 个小时加药，后 42 个小时不加药，采用 PNPP 法检测碱性 磷酸酶（ALP）活性、放射免疫法检测骨钙素(BGP)含量和实时定量 RT-PCR 法检测 Runx2 mRNA 的表达量。 4.采用数据软件包 SPSS22.0 对所有的数据进行处理。定量资料以均数±标准差 （ X ??S ）方式表示，组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用 LSD-t 检验， P＜0.05 有统计学意义。 结果： 1.在显微镜下观察，原代 BMSCs 培养 3 天后贴壁并呈现梭形，5 天后排列呈集 落状，10-14 天左右铺满瓶壁；第三代 BMSCs 的生长曲线结果显示，前 1-2 天为潜伏 期，3-5 天为对数生长期，之后为平台期；细胞周期测定大部分处在 G1/G0 期；流式 I II II 细胞分析仪测定 BMSCs 表面抗原标志物 CD29、CD44 阳性表达，CD45 阴性表达； 将 BMSCs 诱导分化成为成骨细胞后进行茜素红染色，可以观察到钙结节，将 BMSCs 诱导分化成为脂肪细胞后进行油红 O 染色，可以观察到脂滴。 2.将不同浓度 PTH1-34（0、10-10、10-9、10-8mol/L）间断作用于 BMSCs，其增殖 水平无明显变化，各组之间的比较差异无统计学意义（P＞0.05）。 3.将不同浓度 PTH1-34（10-10、10-9、10-8mol/L）间断作用于 BMSCs，其 ALP 活 性、BGP 含量及 Runx2 mRNA 表达量较对照组均增加，其中以 10-8mol/L PTH1-34 组最高，且呈现浓度依赖关系，对照组与实验组，实验组组间比较，差异均有统计学 意义（P＜0.05)。 结论： 1.BMSCs 在体外能被成功分离、纯化，并且具有高度的自我更新及多向分化潜 能。 PTH1-34 可以促进大鼠 BMSCs 成骨分化。 PTH1-34可能是通过上调Runx2 mRNA表达来促进大鼠BMSCs成骨分化。 关键词：甲状旁腺激素；骨髓间充质干细胞；成骨细胞；碱性磷酸酶 PAGE PAGE III Effect of Parathyroid Hormone on the Osteogenic Potential of Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells Abstract Objective： Through isolation culture and identification of the rat bone marrow mesenchymal stem cells, to provide qualified source of cells for experiment. To investigate effect of the different concentrations parathyroid hormone on the osteogenic potential of rat bone marrow mesenchymal stem cells and possible mechanism of action.In order to provide the experimental basics and basis of parathyroid hormone in treatment of osteoporosis. Methods: By adherent culture method,the BMSCs were isolated, cultured and identified. Different concentrations of PTH1-34 (0,10-10