金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成VTG的作用机理研究-生态学专业论文.docxVIP

金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成VTG的作用机理研究．：渤蚴惕 金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成VTG的作用机理研究 ．：渤蚴惕 答 ：臌杉 少I夕≈ r1 Z戒、∥ L ／， |／、 讶 ／一N ， ^ 二孙佰乞 .、 独创 独创 声 明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究 成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已 经发表或撰写过的研究成果，也不包含未获得 l洼!麴遗 直墓丝霞塞挂别直明的：奎拦亘窒2或其他教育机构的学位或证书使用过的材料。 与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示 谢意。 学位论文作者签名：毕·’t) 签字日期：≯口7／年f月矿日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，并同意以下事 项： l、学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文 被查阅和借阅。 2、学校可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用 影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权清华大学“中国学术 期刊(光盘版)电子杂志社用于出版和编入CNKI《中国知识资源总库》，授权中国科 学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》。(保密的学位 论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名： 毕’1巾 翩擀刁貉调 签字日期：力o／f年r月谚日 签字日期： 年 月 日 金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成rig的作用机理研究 金雀异黄素诱导斑马鱼肝细胞合成rig的作用机理研究 摘要 金雀异黄素(Gcnistcin,4’，5，7．三羟基异黄酮)富集于水体和饵料中，能够显著 促进鱼类卵黄原蛋白ⅣTG)的生成，但其诱导鱼类VTG表达的作用机理还不明 确。本文以模式生物斑马鱼(Danio rerio)原代培养肝细胞为实验材料，以特异性 拮抗剂阻断雌激素受体(ERs)或其亚型(ERa或ERfl)，研究了雌激素受体在金雀异 黄素诱导斑马鱼原代肝细胞vtg-1 mRNA合成中的作用；通过检测金雀异黄素对 斑马鱼原代肝细胞中ERa mRNA和E邓mRNA表达水平的影响，进一步探讨了 金雀异黄素是否通过提高Ells的合成来诱导vtg的转录；并对过氧化物酶体增生 物激活受体(PPARs)是否参与金雀异黄素对vtg转录表达的诱导作用进行了初步 的研究。研究结果如下： (1)1-1000 pmol／L金雀异黄素可剂量性诱导雄性斑马鱼离体肝细胞合成 vtg-1 mRNA，其中1000 pmol／L的金雀异黄素诱导作用与1 Itmol／L的17 13-雌二 醇(E2)接近，证明了金雀异黄素具有弱雌激素活性，约为E2的千分之一。 (2)采用雌激素受体特异性拮抗剂(ICI 182780)与1000 pmol／L金雀异黄素联 合暴露雄性斑马鱼原代肝细胞48h后，发现vtg-1 mRNA的相对表达量显著下降， 金雀异黄素对vtg-1 mRNA的诱导作用被显著抑制，结果证实金雀异黄素是通过 雌激素受体途径诱导斑马鱼原代肝细胞产生VTG。 (3)采用ERp的特异性拮抗剂(美服培酮)与1000 lamol／L金雀异黄素联合暴露 雄性斑马鱼原代肝细胞48 h后，vtg-1 mRNA的表达几乎完全被抑制。ERa的特异 性拮抗剂(雷洛昔芬)与1000 pmol／L金雀异黄素联合暴露雄性斑马鱼原代肝细胞 48 h则对vtg-1 mRNA的转录有部分抑制作用。结果表明金雀异黄素主要通过ERp 介导对斑马鱼肝细胞VTG的诱导作用，ERa也部分参与了对VTG合成的介导作 用。 (4)进一步研究金雀异黄素对斑马鱼原代肝细胞ERs合成的影响，结果显示 1000 lunol／L金雀异黄素显著促进了ERa mRNA和E印mRNA的转录，但ERp的表 达量远高于ERa，约为ERa的1．9倍。说明金雀异黄素可通过诱导ERs的表达来促 进VTG的合成，ERO在其中起主要作用。 (5)过氧化物酶体增生物激活受体(PPARs)是金雀异黄素的另一分子靶点。 为了研究PPARs是否参与金雀异黄素对VTG的诱导作用，采用PPARs的特异性拮 为了研究PPARs是否参与金雀异黄素对VTG的诱导作用，采用PPARs的特异性拮 抗剂进行了研究，结果显示斑马鱼原代肝细胞vtg-1 mRNA的表达无显著变化， 初步说明PPARs并不参与金雀异黄素对VTG的诱导作用。 综上，本文研究表明金雀异黄素具有弱雌激素活性，金雀异黄素可通过雌激 素受体途径直接诱导斑马鱼肝脏细胞产生VTG，其中主要是通过ERp进行调节， 金雀异黄素还通过诱导ERs表达的升高，促进VTG的合成。PPAR并不参与金雀 异黄素对VTG的诱导作用。本文初步探明了金雀异