金葡菌SraP操纵子中GtfA和GtfB的序列分析及其调控SraP糖基化的研究-临床检验诊断学专业论文.docxVIP

华中科技大学 硕士学位论 华 中 科 技 大 学 硕 士 学 位 论 文 PAGE 2 PAGE 2 英文缩略词 英文缩写 英文全称 中文全称 S.aureus Staphylococcus aureus 金黄色葡萄球菌 SraP Serine-rich adhesin for Platelets 富含丝氨酸的血小板黏附素 GlcNAc N-acetylglucosamine N-乙酰葡糖胺 GtfA Glycosyltransferase A 糖基化转移酶 A GtfB Glycosyltransferase B 糖基化转移酶 B Fap1 Fimbriae-associated adhesion 1 菌毛相关黏附素 RAPD Random Amplified Polymorphic DNA  随机扩增多态性 DNA 标记 FAM 6-carboxyfluorescein 6-羧基荧光素 MCL Maximum Composite Likelihood 最大似然法 sWGA succinyl Wheat Germ Agglutinin 琥珀酰麦胚凝集素 MecA Methicillin determinant A (基因名称） PVL Panton Valentine Leukocidin (基因名称） HEX 6-carboxy-2-4-4-5-7-7-hexachlor ofluorescein 6-羧基-2-4-4-5-7-7-六氯代荧 光素 前言 金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）是引起医院感染最重要的病原菌之一。 来自德国监测系统的院内感染数据显示，在重症监护病房中，16.5%的院内感染 是由金葡菌所致[1]。金葡菌还是引发外科手术部位感染和下呼吸道感染的首要原 因，是引发肺炎和心内膜炎的第二大原因。在金葡菌心内膜炎的发生中，金葡菌 与血小板结合是非常关键的步骤[1,2]。 研究发现金葡菌通过多种表面分子结合到人类血小板上，例如聚集因子 A， 聚集因子 B，蛋白质 A 和纤维连接蛋白结合蛋白[3,4,5]。最近，富含丝氨酸的血小 板黏附素（SraP），是金葡菌表面的一种糖蛋白，它也能结合到人类血小板上[2]。 与金葡菌野生株比较，金葡菌 SraP 突变株黏附血小板的能力显著下降，另外金 葡菌野生株与 SraP 突变株混合感染新西兰大白兔，心瓣膜赘生物上野生株约占 细菌总数的 75% [2]，说明 SraP 黏附血小板在金葡菌心内膜炎的发生中起重要作 用。另外，免疫印迹实验显示绝大部分临床金葡菌分离株表达 SraP[2]，说明 SraP 介导的血小板黏附不是一个实验室菌株的个别现象，相反，这可能是所有金葡菌 所具有的共同特性。 SraP 包含两个富含丝氨酸的重复序列（R1 和 R2）。两个区域中的氨基酸序 列略微不同，但它们之间间隔的氨基酸序列变化明显[2](图 1A）。SraP 以及 SraP 同源物，包括戈登链球菌的 GspB，血链球菌的 SrpA 和副血链球菌 FW213 的 Fap1，均为糖蛋白[6,7,8]。Fap1 操纵子包括 Fap1 及其毗邻的另外 11 个基因，研 究表明，Fap1 毗邻的 11 个基因中有 9 个基因已被证实参与调控 Fap1 的糖基化 和分泌[7,8,9]，GspB 及其下游的九个基因的基因簇构成了一个 GspB 操纵子，调控 GspB 的糖基化和分泌[6,10,11]。 本研究我们首先搜寻了金葡菌株 N315 的基因组序列，发现一个 SraP 操纵子， 它由 SraP, SecY2, Asp1, Asp2, Asp3, SecA2, GtfA 和 GtfB 组成（图 1B)。置换 SecY2, Asp1, Asp2, Asp3 和 SecA2 中的任一基因，SraP 则主要分布在金葡菌的细胞质， 说明这五个基因是 SraP 从细胞质运输到细菌表面必不可少的[12]。但是目前还不 清楚哪个基因参与 SraP 的糖基化。系统发生树分析表明 GtfA 和 GtfB 同源物在 多种革兰阳性球菌中高度保守[7]。在副血链球菌 FW213 中，Gtf1 和 Gtf2(副血链 球菌中 GtfA 和 GtfB 是同类物）复合物的形成是 Fap1 糖基化所必需的[13,14]。在 戈登链球菌 M99 中，GtfA 和 GtfB 在细胞质中将糖残基转移到 GspB 上[15]。因此 我们有理由相信金葡菌中 SraP 操纵子的 GtfA 和 GtfB 参与调控 SraP 的糖基化。 鉴于我们推测金葡菌中的 GtfA 和 GtfB 参与调控 SraP 的糖基化，首先有必要 了解不同金葡菌分离株中 GtfA 和 GtfB 是否高度保守。因此，在本研究