免疫技术的原理与进展.ppt

UCP独特的优势 ①高敏感性，有报道 UCP 的灵敏度可达胶体金的 100 倍。 ②高稳定性，UCP 的发光信号不受检测环境或样品腐蚀或标志物自身衰变等的影响，可长期存放和可重复。 ③使用简便，安全无毒，可适用于定量分析与多重分析，在一般的实验室或野外现场都可轻松应用. * ppt课件 中科院报道了一种用于免疫活性检测的UCP试纸条读数计，采用半导体激光器作为光源，CCD作为光电接收器，步进电机带动控制试纸条移动的装置 UCP应用举例 * ppt课件 军事医学科学院研制出一种UPT十通道免疫层析试纸盘，同时检测多种抗体以确证是否感染鼠疫菌 * ppt课件 霍乱弧菌—霍乱—烈性肠道传染病 甲胎蛋白(AFP）-肝癌的特异性指标。 * ppt课件 荧光免疫层析技术的原理与进展 * ppt课件 荧光免疫层析技术的基本原理 层析法(chromatography)的原理是利用混合物中各组分的物理性质之差(如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等)而建立来的一种分离技术。 层析系统是由固定相(stationary phase)和流动(Mobile Phase)相组成。 * ppt课件 固定相是固体物质或固定于固体物质上的成分。 流动相是可以流动的物质，如水或各种溶剂。 层析过程：当待分离混合物随流动相通过固定相时，由于混合物各组分的理化性质的差异，与固定相相互作用弱的组分随流动相移动时受到的阻滞作用小，向前移的速度快；与固定相相互作用强的组分向前移动的速度慢。从而实现混合物中各组分的分离。 * ppt课件 免疫层析法 免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上的一项新兴免疫检测技术。 * ppt课件 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。 待测物 层析方向 免疫反应 T C 免疫层析技术基本原理示意图 * ppt课件 荧光（fluorescence） 荧光物质吸收激发光的能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光。 发射光谱和激发光谱 发射光谱是指固定激发波长，在不同波长下记录的样品发射荧光的强度。 激发光谱是指固定检测发射波长，用不同波长的激发光激发样品记录的相应的荧光发射强度。 * ppt课件 荧光效率 定义:荧光物质分子将光能转变成荧光的百分率 计算公式: 荧光效率= 荧光寿命 定义:荧光物质被激发后所产生的荧光衰减到一定程度时所用的时间。 各种荧光物质的荧光寿命不同。 * ppt课件 荧光淬灭 定义:荧光物质在某些理化因素作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。 引起荧光淬灭的因素：有如紫外线照射、高温、某些硝基化合物、重氮化合物等。 * ppt课件 免疫层析技术以固定有检测线和控制线的条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，通过毛细作用使待测物在层析条上移动。 待测物在T线处发生特异性免疫反应。 游离物在C线处发生免疫反应。 待测物 层析方向 免疫反应 T C 免疫层析技术基本原理示意图 * ppt课件 常用荧光免疫层析法 夹心法 竞争法 双抗原夹心法 双抗体夹心法 * ppt课件 竞争法 待测物中的某种抗原与T（检测线）线处同种抗原竞争性地与标记抗体相结合的过程。 * ppt课件 竞争法 含抗原A Y1:A的单抗与标记物的偶联体 Y2：抗原A Y3:羊抗鼠二抗 结合垫 免疫层析法检测的实物图 * ppt课件 夹心法 待测物中某种抗体（抗原）与T线处抗原A（抗原A）以及荧光标记的抗原（抗体）特异性相结合的过程，在T线处形成抗体A+抗原+抗体B形式的夹心结构。 结合垫 免疫层析法检测的实物图 * ppt课件 双抗体夹心法 (k)Ab1-Ag-Ab2 (k)Ab1 (k)Ab1-Ag Ab2 Ab3-(k)Ab1 T C 阳性结果T,C均有颜色 待测液含抗原Ag 待测液，不含抗原Ag (k)Ab1 (k)Ab1 (k)Ab1 Ab2 T C Ab3-(k)Ab1 阴性结果T无颜色，C有颜色 双抗体加心法检测原理图 K代表某一标记物 结合垫 免疫层析法检测的实物图 * ppt课件 双抗原夹心法 双抗原夹心反应模式