金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响-临床兽医学专业论文.docxVIP

lIIIlll lIIIlll II II II 111Illl llll III 独创性声明 ＼1 881 939 - ≯。。 本人提交的学位论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的 研究成果。论文中引用他人已经发表或出版过的研究成果，文中已 加了特别标注。对本研究及学位论文撰写曾做出贡献的老师、朋友、 同仁在文中作了明确说明并表示衷心感谢。 学位论文作者：万向 签字日期： z o／／年f月沙日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的 规定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘， 允许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院(筹)可以将 学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影 印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：口不保密， 学位论文作者签名：乃向 导师签名：二纷 口保密期限至 年 月止)。 签字日期： 歹口／／年歹月即日 签字日期：矽，，年夕月加日 专 专 ( 目 目 录 目 录 摘要 ．I ● Abstract III ≯ 第l章文献综述 ．1 1．1传统中医学对衰老的认识与探讨 ．．1 1．1．1传统中医学对衰老的认识 ．．1 1．1．2传统中医学对衰老机理的解释 ．2 1．1．3传统中医养生学的发展 ．2 1．2现代医学对衰老的认识 3 1．2．1自由基学说 ．．3 1．2．2线粒体DNA损伤学说 4 1．2．3端粒学说 ．4 1．2．4衰老的基因学说 ．5 1．2．5大分子交联学说 ．5 1．2．6免疫学说 ．5 1．2．7神经内分泌学说 ．6 1．3中药抗衰老的现代研究进展 ．．6 1．3．1抗衰老中药对寿命的影响 ．．6 1．3．2抗衰老中药的免疫调节作用 7 1．3．3抗衰老中药对体内自由基的影响 ．．7 1．3．4抗衰老中药对内分泌的影响 7 1．3．5抗衰老中药对衰老相关基因的影响 8 1．+3．6抗衰老中药对端粒酶的影响 8 1．4金匮肾气丸的组方原理及抗衰老的研究进展 8 1．4．1金匮肾气丸的组方原理 ．9 1．4．2金匮肾气丸抗衰老的研究进展 ．9 第2章引言 ．．； ．1l 2．1研究目的和意义 ．．11 两南大学硕：I：学1证论文2．2技术路线 两南大学硕：I：学1证论文 2．2技术路线 11 第3章材料与方法 ．13 3．1材料 ．13 3．1．1实验动物 ．13 ■ 智 3．1．2中药 ．．13 3．1．3培养基 13 3．1．4主要试剂 ．． ．．13 3．1．5常用缓冲液与储存液的配制 14 3．1．6主要仪器设备 15 3．1．7质粒载体与菌种 ．15 3．2方法 i 15 3．2．1实验动物分组 15 3．2．2造模 ．．16 3．2．3金匿肾气丸水煎液的制备 ．．16 3．2．4给药 ．．16 3．2．5样本采集 ．16 3．2．6模型的评价 ．．16 3．2．7组织中端粒酶(TE)含量的测定 ．．17 3．2．8组织样本RNA的提取 18 3．2．9引物设计与合成 ．19 3．2．10反转录合成eDNA ．．19 √ 1 3．2．11 TERT和B-actin基因片段的克隆 ．．20 3．2．12 TERT基因相对表达量测定 23 第4章结果与分析 25 4．1I临床指标的观测 ．25 4．2血清总抗氧化能力(T—AoC)的测定 ．25 4．3组织中端粒酶(TE)含量的测定 ．．26 4．4组织样本RNA的提取 ．．27 4．5目的基因片段的RT-PCR扩增 ．28 目 目 录 4．6 T-A克隆及测序 29 4．6．1阳性克隆的PCR筛选 ．．29 4．6．2测序 ．29 4．7金匮肾气丸对TERT基因表达的影响 29 第5章 讨论 37 5．1衰老模型小鼠的建立 ．37 5．2金匮肾气丸对衰老模型小鼠一般体征及T-AOC的影响 37 5．3金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响 ．．38 5．4展望 39 参考文献 ．4l 附录 47 致谢 ．．49 在校期间发表的文章 5l 、 一 西南大学硕 t学位论文 ? ? lV 摘要金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响 摘要 金匮肾气丸对衰老模型小鼠端粒酶的影响 临床兽医学专业硕士研究生 万向 指导教师 马跃教授 摘要 本课题在总结传统中医对衰老的认识与探讨的基础上，结合抗衰老的现代研究机制，对 祖国医学中具有温补肾阳功效的金匮肾气丸进行抗衰老机制的实验研究，为中医药抗衰老提 供实验研究依据。 方法： (1)造模和治疗：分别给模型对照组、试验组小鼠颈部皮下注射胁半乳糖溶液(100mg／kg)， 同时给正常对照组小鼠颈部皮下注