补体调节蛋白CD46与CD59在胃癌组织中的表达及其临床意义.pdfVIP

研究论文 临床意义 -屿-^一 翮 声 补体系统由一系列游离在血浆及附着在细胞膜上的蛋 白质组成。补体系统的主要功能主要生理功能是促进吞噬和 溶解靶细胞等作用。补体激活有三条途径：经典激活途径、 旁路激活途径、MBL激活途径。补体系统的活化过程存在精 密的调控机制，主要为：①控制补体活化的启动；②补体活 性片断的自发性衰变；③血浆中和细胞膜表面存在多种补体 调节蛋白(complementregulatory attack 制级联酶促活性和补体攻膜复合物(membrane 验室研究证明，补体系统在针对肿瘤的细胞毒作用中扮演重 要角色，主要通过抗体依赖介导的细胞毒作用(ADCC)和补体 依赖的细胞毒作用(CDC)发挥抗肿瘤作用。但补体介导的肿 瘤细胞溶解作用，其有效性受到许多保护机制的阻碍，而这 种保护机制正是机体自身免于自身补体介导的细胞毒作用 表达一类分子或几类分子，通过影响补体激活的多个环节， 使肿瘤逃避补体攻击。这种抵制免疫攻击的作用机制遍及肿 瘤的发展和分化过程，并起重要的作用，甚至决定肿瘤患者 的预后‰朝。 研究论文 的表达进行检测研究，目的在于探讨二者的表达与胃癌临床 病理特征的关系以及二者在胃癌发展中的作用。 材料与方法 1． 材料： 1．1病例标本： 医院胃外科胃癌石蜡标本56例：男性37例，女性19例； 结无转移16例，淋巴结有转移40例；高分化9例、中分化 另取同期外科手术切除的胃标本正常胃黏膜20例，常规甲 醛固定，石蜡包埋。所有患者手术前均未接受放、化疗。 1．2． 试剂： 0．OIM PBS缓冲液(PH7．4)；二甲苯；梯度酒精；自来 水和蒸馏水；柠檬酸盐缓冲液；DAB_H。0。液；苏木素；中性 树胶；鼠抗人CD46单克隆抗体与鼠抗人CD59单克隆抗体(购 1．3主要仪器： 迈新免疫组化小设备(孵育盒，耐高温切片架，冲洗瓶，移 液器等)。 2．免疫组化方法(S-P法)： 研究论文 2．1．实验步骤t 采用链菌素抗生物素蛋白一过氧化物酶免疫组化法(S-P 法)检测胃癌及正常胃黏膜组织中CD46和CD59蛋白的表达。 设定己知的阳性切片作阳性对照，用PBS液代替一抗作阴性 对照。 u (1)、石腊切片4 m，常规二甲苯脱蜡3次，每次10分 钟，经梯度酒精(95％、80％、70％)水化，蒸馏水荡洗2次， 每次5分钟。 (2)、PBS(PH7．4)冲洗三次，每次三分钟。 p (3)、每张切片加一滴(501)过氧化酶阻断溶液，室 温下孵育20分钟，以阻断内源性过氧化酶的活性。PBS冲洗 三次。 (4)、进行组织抗原修复，具体方法：将切片浸于柠檬 冲洗三次，每次三分钟。 u (5)、除去PBS液，每张切片加一滴(501)正常非免 疫动物血清室温下孵育10分钟。 II (6)、除去血清，每张切片加一滴(50l，工作浓度1： 克隆抗体，4。C湿盒过夜。第二日取出后，室温下放置30分 钟。 (7)、PBS冲洗三次，每次三分钟。除去PBS液，每张切 u 片加一滴(501)生物素标记的第二抗体，室温下孵育10 分钟。PBS冲洗三次每次三分钟。 1．t (8)、除去PBS液，每张切片加一滴(501)链霉菌抗生物 素一过氧化物酶