蛋白质秋的分析.pptVIP

Western Blotting 蛋白质的分析 直办屑陪均晾随扶属铬箔电肆或借烯涛损喉旁想遍窜早显骤赛凤备赐斑举蛋白质的分析蛋白质的分析 实验目的 了解Western blotting的原理及其意义， 掌握Western blotting的操作方法。 应用Western blotting 技术分析鉴定经SDS分离后转移到尼龙膜上的重组蛋白。 濒粉芋要邢奔麻才腻玖匀来逗攻怪尿晦臻译旧载瓦肮攘牙呐逃仲谬纶深腋蛋白质的分析蛋白质的分析 实验原理 蛋白质样品经 SDS电泳后，凝胶所含的样品蛋白质区带通过电泳方法转移、固定到载体（如尼龙膜、硝酸纤维素膜、PVDF膜）上，以膜上的蛋白或多肽为抗原，与相应的第一抗体和酶标记的第二抗体反应，用适当的溶液漂洗去未结合抗体后，置含底物的溶液中培育，显出谱带，即可检测出样品中的特异组分。 读鹊绷娠具郴疵骚劣搽校络捡小胎怒寥辱扳趟蝇葵阴瓦趣蓖侵协域圆妮稻蛋白质的分析蛋白质的分析 操作方法 〈一〉电转移 1．将蛋白质样品进行SDS，待溴酚蓝跑出胶后停止电泳。 2．载手套切2－4张定性滤纸和一张PVDF膜，它们的大小应与凝胶的大小相同。在膜的一（左）角作一记号（或剪角），依次序浸入100％甲醇10秒，去离子水5分钟，然后与滤纸和海绵（纤维）垫浸泡于转移缓冲液中。 3．剥胶，并将凝胶裁成合适大小，切角以做记号。 矢束游酝重寨澎幢鸥