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DNS法测还原糖和总糖 配制试剂 1mg/mL葡萄糖标准液 预先将分析纯葡萄糖置于80℃烘箱内约12小时，至恒重。准确称取500mg葡萄糖置于烧杯中，加少量蒸馏水溶解后，转移到500mL容量瓶中，用蒸馏水定容至500mL，混匀，4℃冰箱中保存备用。若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。 3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂） 将5.0g 3,5-二硝基水杨酸溶于200ml 2mol/L氢氧化钠溶液中 (注意:在加入氢氧化钠过程中, 不适宜用高温促溶，溶液温度不要超过48℃)，接着加入500mL含130g酒石酸钾钠的溶液，混匀。再加入5g苯酚和5g无水亚硫酸钠，搅拌溶解后，定容至1000ml。储存在棕色瓶中，避光暗处保存备用。（室温下存放7天后可以使用,有效期为6个月） 绘制标准曲线 将1mg/mL葡萄糖标准液制成浓度为0.5g/L的葡萄糖标准液，分别取标准溶液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，补水至1mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值，浓度—吸光值作标准曲线，用1.0mL蒸馏水做空白对照。 还原糖测定 取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值。用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。根据标准曲线计算出还原糖浓度。 总糖测定 取稀释到适当浓度的发酵液1.0mL，加入6mol/L HCL溶液0.75mL，沸水浴20分钟，冷却至室温，加入6 mol/L NaOH溶液1.0mL， DNS 1.5 mL，沸水浴显色5分钟，冷却后补水至10 mL，550nm处测定吸光值。用蒸馏水代替稀释后的发酵液做空白对照。根据标准曲线计算出总糖浓度。 原理 DNS即二硝基水杨酸法是利用碱性条件下，二硝基水杨酸（DNS）与 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=158737 \t _blank 还原糖发生 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=256191 \t _blank 氧化还原反应，将3，5－二硝基水杨酸中的硝基还原为氨基 ，生成 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=144623120ss_c=ssc.citiao.link \t _blank 3-氨基-5-硝基水杨酸，该产物在煮沸条件下在过量的氢氧化钠碱性溶液中呈桔红色，在540nm波长处 有最大吸收，且在一定浓度范围内颜色深浅与 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=158737 \t _blank 还原糖含量成比例关系的原理，用 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=345468 \t _blank 比色法测定 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=158737 \t _blank 还原糖含量的。因其显色的深浅只与糖类游离出还原基团的数量有关，而对 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=158737 \t _blank 还原糖的种类没有选择性，故DNS方法适合用在 多糖（如 纤维素、 半纤维素和 淀粉等） 水解产生的多种 HYPERLINK /lemma/ShowInnerLink.htm?lemmaId=158737 \t _blank 还原糖体系中。