基于类器官3D培养和高内涵成像的药物肝毒性评价模型研究Thethree.PDFVIP

药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 17, 52 (7): 1055 1062 ·1055 · 于类器官3D 培养和高内涵成像的药物肝毒性评价模型研究 1 2 1 4 1 1 1 李朋彦 , 春雨 , 陆小华 , 石 伟 , 高 源 , 崔鹤蓉 , 李婷婷 , 1 1 3 1* 柏兆方 , 肖小河 , 王韫芳 , 王伽伯 (1. 解放军302 医院全军中医药研究所, 北京 100039; 2. 中国医学科学院肿瘤医院, 北京 10002 1; 3. 北京输血医学研究所, 北京 100850; 4. 河北北方学院, 河北 张家口 075000) 摘要: 本研究采用HepaRG 细胞建立类器官 (organoids) 3D 培养模型, 并结合高内涵成像技术建立药物肝毒 性体外评价方法。通过氢化可的松和二甲基亚砜 (DMSO) 诱导, 使HepaRG 细胞分化为明显的肝细胞形态和胆 管样结构, 并诱导 物代谢酶、药物转运体、核受体及肝细胞特异标志性分子白蛋白 (ALB) 等相关基因的表达, 形成稳定的模拟肝脏功能的类器官体外评价模型; 采用高内涵成像技术, 通过荧光染料进行特异性、多靶点染色, 从类器官球体表型、活/死细胞数量、线粒体膜电位 (MMP) 和细胞内活性氧 (ROS) 评价药物肝毒性。结果表 明, 采用 HepaRG 细胞建立的类器官体外评价模型可以准确地评价肝毒性阳性对照 胺碘酮 (amiodarone, AMD) 、环孢霉素 (cyclosporin, CSP) 及阴性对照 阿司匹林 (aspirin, ASP) 的毒性差异: 其中AMD 和CSP 均 浓度依赖地导致类器官球体的总细胞数和活细胞数下降, 并且AMD 浓度超过 50 μmol ·L 1 时, 还导致类器官球 体中死细胞数急剧增多, 而ASP 对类器官无明显损伤作用; AMD 和 CSP 均浓度依赖地导致MMP 下降和ROS 水平增高, 且AMD 的作用强度大于CSP, 而ASP 对类器官无明显损伤作用。综上, HepaRG 细胞建立的类器官 高内涵成像评价方法可用于 物肝毒性的体外评价, 并且具有多靶标高通量、结果直观且可定量等优 。 关键词: 类器官; 高内涵成像; 肝毒性评价; 线粒体膜电位; 活性氧 中图分类号: R965.1 文献标识码: A 文章编号: 0513-4870 (2017) 07-1055-08 The three dimensional organoids-based high content imaging model for hepatotoxicity assessment 1 2 1