白花檵木促大鼠皮肤伤口愈合物质基础初步探究.docxVIP

白花繼木促大鼠皮肤伤口愈合物质基础初步探究 ［摘要］目的：观察白花櫃木粗提物(extract of Loropetalum chinens, ELC)促大鼠皮肤伤口愈合作用，并 对粗提物分离提取得到的组分进行促愈合药理筛选，为白花 権木促皮肤愈合物质基础研究奠定工作基础。方法：应用酶 解和溶剂萃取手段制备白花摧木粗提物，进而以有机溶剂对 粗提物萃取，获得多种分离组分；采用大鼠皮肤割伤模型 (incision wound model)和切除伤模型( excision wound model)2种国际常用体内模型研究白花繼木粗提物及分离组 分的促愈合作用，对伤口进行愈合病理和免疫组织化学染色 观察；对白花繼木粗提物进行初步分离，并采用大鼠皮肤割 伤模型对分离提取产物进行促愈合作用筛选。结果：白花繼 木粗提物可显著促进大鼠皮肤伤口的愈合速度，缩短愈合时 间，增加愈合后皮肤抗拉强度，促进伤口处细胞及血管新生; 白花槿木粗提物的初步分离提取组分中，石油瞇层，乙酸乙 酯层和正丁醇层促皮肤愈合作用较强，提示白花繼木的促愈 合作用物质极性较小。结论：白花繼木粗提物具有显著促愈 合作用，石油瞇层、乙酸乙酯层和正丁醇层3种分离组分促 愈合作用较强，推测白花櫃木促愈合功效活性物质极性较 小。 ［关键词］白花繼木；伤口愈合；割伤模型；切除伤模 型 白花権木是金缕梅科Hamamelidaceae繼木属的常青灌 木植物，分布于赣湘亚热带地区，具有重要的药用价值。白 花権木始载于《植物名实图考》，具有“愈合止血、涩肠止 泻、生肌、消炎、镇痛”之功效，应用于治疗创伤出血。与 白花樓木同种属的北美金缕梅也广泛应用于烧伤等皮肤疾 病的治疗。繼木的提取部位主要包含单宁类和多酚成分，植 物中的多酚成分已被证实具良好的促伤口愈合功效。根据白 花槿木的历史记载、民间用药习惯均显示白花繼木止血愈 合、促进伤口愈合效果显著，但是缺乏科学的实验验证，促 愈合功效物质基础和作用机制也未见报道［1-3］ o本文以白 花繼木粗提物及其初步分离产物为研究对象，以大鼠皮肤割 伤和切除伤作为研究模型研究白花櫃木的促愈合功效，为白 花権木促皮肤愈合物质基础研究奠定工作基础。 1材料 1动物Wistar大鼠，雄性，150?200 g,购自中国 食品药品检定研究院实验动物资源中心，许可证号SCXKC京） 2009-0017o 1.2药物与试剂白花繼木粗提物，棕褐色粉末，由江 西德宇集团提供（批；咲喃西林原料药购自枫 松实验用品专卖店；苏木素-伊红（HE）染色试剂盒购自北 京博奥森生物技术有限公司；CD34 mouse antibody购自美 国GeneTex公司；Go a Mo IgG/HRP购自北京中杉金桥生物 技术有限公司；戊巴比妥、DAB显色液购自美国Sigma公司； 海藻酸钠、甲醇、甲酸等试剂均购自国药集团化学试剂公司。 3仪器 小动物麻醉机（美国Matrix）,数码相机（日 本OLYMPUS）, FB-20拉力计（苏州伟创精密仪器有限公司）, 石蜡切片机（美国A0）,正置显微镜（日本NIK0N）o 2方法 1白花繼木粗提物及分离组分提取物制备将白扌11木 鲜材料破碎，采用酶解获得白権木破壁产物，采用温浸法提 取16h,得到提取浸膏；先用醇提水沉法去除叶绿素等脂溶 性杂质，再用水提醇沉法去除糖类等水溶性杂质，得到白花 繼木粗提物（extract of Loropetalum chinens, ELC）,质 量为生药量的5. 5%?6%。将白花樓木粗提物按照如下步骤进 行组分分离提取：白花櫃木粗提物粉末481.3 g （约含生药 量8 kg）, 95%乙醇提取2次，溶剂用量分别为3 600, 3 000 mL,提取时间均为lh,得提取物170 g （1号），得率35. 3%； 然后剩余残渣继续用80%乙醇提取1次，溶剂用量3 000 mL, 提取时间1 h,得到提取物90 g （6号）。将1号样品留样 9.8 g,其余进行水分散，以不同溶剂萃取，得到组分提取 物：石油瞇层1.038 g （2号），乙酸乙酯层33.4 g （3号）, 正丁醇层45. 829 g （4号），水层88. 3 g （5号）；将6号样 品留样9.9 g,其余进行水分散，以不同溶剂萃取，得到组 分提取物：乙酸乙酯层6.272 g （7号），正丁醇层13. 125 g （8号），水层64 g （9号）。 2.2试剂配制2%海藻酸钠：称取20 g海藻酸钠，分次 加入1 000 niL蒸馆水中并加热，待其溶胀后搅拌至全溶；1% 咲喃西林：称取0. 5g咲喃西林溶于50 mL的2%海藻酸钠中， 充分搅拌，每隔4 d重新配制；1%白花繼木受试物：称取0.5 g受试物（如白花権木粗提物，1号组分、2号组分