三种鳖线粒体DNA细胞色素b基因序列的比较分析陈合格刘文彬.PDF

第 30 卷 第 4 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 30 ,No . 4 2 0 0 6 年 7 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA July , 2 0 0 　6 三种鳖线粒体 DNA 细胞色素 b 基因序列的比较分析 陈合格　刘文彬　李建中　张轩杰 (湖南师范大学生命科学学院 ,长沙　410081) 摘要 :对中华鳖、砂鳖和山瑞鳖线粒体 DNA 细胞色素 b 基因进行了引物设计、PCR 扩增、序列测定和 PCRPFLP (Polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism) 分析。研究结果表明中华鳖、砂鳖与山瑞鳖线粒体 ( ) ( ) DNA Cytb 基因的序列全长相同 ,均为 1140bp ,其 A 、C 、G、T 含量相似 ,分别为 378 个 33. 2 % 、322 个 28. 2 % 、122 个 ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) ( ) 、330 个 10. 7 % 、318 个 27. 9 % 、373 个 32. 7 % 、324 个 28. 4 % 、124 个 10. 9 % 、319 个 28. 0 % 、380 个 33. 3 % ( ) ( ) ( ) 28. 9 % 、127 个 11. 1 % 、303 个 26. 7 % 。同源性及序列差异率分析表明: 中华鳖与砂鳖 b 基因序列的同源性为 92. 3 % ,中华鳖、山瑞鳖的为85. 0 % ,砂鳖、山瑞鳖的为 84. 1 % ; 中华鳖与砂鳖 b 基因核苷酸序列间的差异率为 7. 7 % ,中华鳖、山瑞鳖间的序列差异率为 15. 0 % ,砂鳖、山瑞鳖间的序列差异率为 15. 9 % ,而中华鳖、砂鳖、山瑞鳖 各自个体间的序列差异率分别为2. 37 % 、0. 88 %和0. 18 % ,种间差异显著。用内切酶酶切分析其扩增产物 ,结果表 明:用内切酶 Nde Ⅰ可准确鉴别砂鳖,而用内切酶 Bam H Ⅰ则可准确鉴别山瑞鳖。内切酶Nde Ⅰ和Bam H Ⅰ的联用 分析 ,可使这三种鳖在分子水平都得到明确的鉴定。从三种鳖线粒体 DNA Cytb 基因核苷酸序列的显著差异和酶 切位点的变化 ,可以进一步证明砂鳖是不同于中华鳖的鳖属一新种。 关键词 : 中华鳖;砂鳖 ; 山瑞鳖;细胞色素 b ;PCRRFLP 分析 ;分子鉴定标记 ( ) 中图分类号:Q173 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2006 ( ) ( ) 　　中华鳖 Pelodiscus sinensis 是中国重要的特种经 动物线粒体 DNA mtDNA 呈严格的母性遗传方 ( ) ( 济动物 ,其隶属于龟鳖目 Testudinata 、鳖科 Triony 式 ,这样 1 个个体就能代表一个母系集团 ,因而只需 ) (