细菌遗传研究.docxVIP

第五章细菌遗传研究 一、教学目的和要求： 1、 了解原核生物细菌的遗传特点，并掌握如何进行细菌染色体的遗传作图。 2、 掌握细菌的遗传方式（转化、接合、性导、转导）与遗传作图；病毒的 遗传方式。 三、 教学重点： 细菌染右体的遗传作图。 四、 教学难点： 细菌的转导和接合过程；细菌染色体的遗传作图。 四、 教学方法： 面授并辅以多媒体教学 五、 教学内容 自然界所有的生物都可以归入真核生物（eukaryote）和原核生物（prokaryote）两大类。 细菌和蓝绿藻属于原核生物。构成原核生物的细胞是原核细胞。原核细胞最基木的特征是 没有明确的核膜和核结构，也没有线粒体等细胞器，不能进行典型的有丝分裂和减数分裂, 只通过简单的裂殖方式增殖。因此，它们的遗传物质传递和重组的方式与真核生物不同。 遗传学研究从经典水平发展到细胞水平，一个重要的条件是Morgan利用了果蝇这个模式 试验材料。从细胞水平发展到分子水平，有两个必不可少的条件：（1）对基因的物理结构和 化学结构的了解；（2）以微生物为研究材料。 真核牛?物基因分离、自由组合及连锁交换均通过有性过程（减数分裂——受精）实现。细 菌和病毒均属于原核生物不存在严格意义上的有性过程。 但细菌细胞内除了染色体外还有一些寄生性复制因子（如噬菌体和质粒，也被称为核外 或染色体外因子），它们可以在细胞间传递，并且形成细菌染色体间以及细菌染色体与核外 遗传因子I可的重组体。 -这种重组体结构类似于真核生物减数分裂过程屮形成的重组体结构。 第一节细菌的细胞和染色体 一、细菌（Bacteria） 细菌是单细胞生物，是地球上最多的一类生物，它占据了地球上大部分的生 物干重。 细菌的繁殖非常快，在适宜的条件下，每20分钟就能繁殖一代，从一个细 胞裂殖变成两个细胞。假如以一个细胞为基数，繁殖一代成为2个，繁殖2代成为 4个。繁殖n代，就有2n-l + l个。一昼夜以24小时计，可以繁殖72代，总个数为 271+1=2. 36X1021。 细菌的基因组很小，只有一条染色体，研究起来非常方便。细菌群体大，即 使突变率很低，也很易得到各种不同的生化突变型。 细菌遗传研究的方法： 用液体培养基培养细菌，待其繁殖到一定程度，用吸管吸取几滴培养液， 滴到固体的琼脂糖培养基上，用一根灭菌的玻璃棒涂布均匀。若涂布的细菌浓度很 低，单个细胞可以分散开来（图7 — 2）。由于每个细胞不移动的裂殖增生，经过大 约一夜，每个细胞的后代可达107个，且集合成群，成为肉眼可见的菌落（colony）, 或称为克隆（clone）。 单个细菌繁殖而成的菌落中，每个细胞的遗传组成都应该是一样的，但可以 发生突变，突变后所形成的菌落也会发生相应的变化。 突变有儿类：形态性状突变、生理特性突变、抗性突变。 菌落形状的突变包括菌落的大小、形状和颜色。如引起小鼠肺炎的野生型肺炎双球 菌本來形成大而光滑的菌落，而有一种突变形的菌落小而粗糙。 生理特性的突变主要是丧失合成某种营养物质的能力，称为营养缺陷型。如 野生型细菌可以自己合成色氨酸，可能突变以后就不能合成了，若不在培养基屮添 加色氨酸，该菌就会死亡。营养缺陷型可以用不同的选择培养基来检测。 抗性突变主要是指抗药性的突变。在野生型细菌培养基中加入青霉素 （penicillin），对以阻止细胞壁的形成，从而杀死细菌。但有抗penicillin的菌 株，记为pen r ,对penicillin敏感的菌株（野生型）记为pen s。 检测突变的方法一一影印法。 先在一个母板（master plate）上使细菌长成菌落。 用一个比培养皿略小的木板，包上消过毒的丝绒。在母板上印一下，使 菌落吸附在丝绒上，再把丝绒印到各种不同成分的培养基上。（事先应在培养皿的 不同方向作好标记） 假如在缺乏色氨酸的培养板上有一个菌落不能生长，则该菌落很可能是色氨 酸营养缺陷型，记为try -。即可在母板上的对应位置挑取菌落，继续培养，供进 一步研究。 若在加有penicillin的培养板上能够生长的菌落，一定是pon r突变型， 可以直接挑取，供进一步研究屮。 第二节大肠杆菌的突变型及筛选 ?一、大肠杆菌的突变类型 （一）合成代谢功能的突变型（anabolic functional mutants）: 合成代谢功能（anabolic function）:野生型（原养型）品系在基本培养基上具有合成所有代谢 和生长所必须的复杂有机物的功能。 营养缺陷型：一个必需的基因发生了突变不能进行一个特定的生化反应，从而阻碍整个 合成代谢功能的实现。 ?条件致死突变 （二）分解代谢功能的突变型（catabolic functional mutants）:^件致死突变型。 分解代谢功能（anabolic function）：野生型大肠杆菌