氮法测定血清总胆红素和直接胆红素.doc

PAGE PAGE 1 氮法测定血清总胆红素和直接胆红素 一、胆红素的代谢 正常人血中胆红素来源有以下几种 （1）大部分来自于衰老RBC破坏后的Hb衍化而成 （2）小部分来自于非Hb的血红素蛋白质的血红素辅基分解，即分路胆红素 （3）极少部分来自于骨髓无效造血所产生的胆红素 胆红素与ALB结合后为肝细胞摄取并转变为水溶性的结合胆红素，排至胆汁中，结合胆红素在肠道中被细菌作用还原成尿胆原，在肠道被吸收入门静脉，大部分肠肝循环，另一部分入体循环，经肾排泄入尿。 因此，在胆红素代谢的上述途径中有任一环节受阻，均可导致结合或非结合胆红素升高而产生黄疸。 二、胆红素测定的意义 测定胆红素有助于鉴别溶血性黄疸，肝细胞性黄疸及梗阻性黄疸 联合其它检测项目还可鉴别肝内淤胆和肝外梗阻性黄疸 溶血性黄疸肝细胞性黄疸梗阻性黄疸 血浆总胆红素（mg/dl）＜51-70不完全梗阻10~15，完全梗阻20~30 未结合胆红素高度增加增加增加 结合胆红素正常增加高度增加 尿胆素定性阴性阳性强阳性 尿中胆素原增多不定或升高减少或消失 粪中胆素原增多减少减少或消失 三、测定原理 血清中结合胆红素可直接与重氮试剂反应产生偶氮胆红素，所以称为直胆，又称1min胆红素测定，非结合胆红素测定时要以咖啡因、苯甲酸钠为加速剂破坏胆红素氢键再与重氮试剂反应，抗坏血酸破坏剩余重氮试剂，加入碱性酒石酸钠使最大吸光度由530nm转到598nm，非胆红素的黄色色素及其它红色与棕色色素产生的吸光度降至可忽略不计，使灵敏度和特异性升高，最后形成的绿色是由兰色的碱性偶氮胆红素和咖啡因与对氨基苯磺酸之间形成的黄色色素混合而成。 试剂：（1）咖啡因（2）碱性酒石酸钠液（3）亚硝酸钠液 （4）对氨基苯磺酸溶液（5）重氮试剂（将3、4混合） （6）5g/LNaN3（7）胆红素标准液 操作： 总胆管结合管对照管 血清（ml）0.20.20.2 咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml）1.61.6 对氨基苯磺酸溶液（ml）0.4 重氮试剂（ml）0.40.4 混匀后，总胆管置室温10min，结胆管置37℃1min NaN3（ml）0.05 咖啡因-苯甲酸钠试剂（ml）1.55 碱性酒石酸钠溶液1.21.21.2 以对照调零，测各管A600，查标准曲线 正常参考值：血总胆红素5.1~19umol/L(0.3~1.1mg/dl) 血清结合胆红素1.7~6.8umol/L(0.1~0.4mg/dl) 四、方法与评价 本法稳定性好、灵敏度高、轻度溶血无影响 胆红素对光敏感，标本与标准品应避光，血脂会干扰测定，因此应取空腹血。