胶乳增强免疫透射比浊法测定抗“O’的方法学评.doc

PAGE PAGE 1 胶乳增强免疫透射比浊法测定抗“O’的方法学评 以往检则ASO多采用乳胶凝集法，该方法灵敏度不高，重复性欠佳，受实验环境等因素影响较在，不能满足临床对ASO定量的要求。我们对胶乳增强免疫透射比浊法定时测定抗“O”进行方法学评价，具有较好的临床应用价值。 　　1材料与方法 　　1.1试剂 　　由北京科美东雅生物技术有限公司提供批号为：Lot：060905。 　　1.2仪器 　　日立7600全自动生化分析仪。 　　1.3检测对象 　　正常对照组：健康体检血清30例，年龄5～70岁之间；明确诊断为风湿性疾病患者血清50例，年龄在5～70岁之间；未明确诊断但ASO含量增高的患者血清20例。在进行各组ASO含量检测后，收集分装，并冷冻保存备用。 　　1.4方法 　　1.4.1测定原理 　　利用抗原抗体特异性反应原理测定血清中ASO含量。 　　1.4.2主要参数 　　方法：终点法波长：540nm试剂及样本比例：试剂i1800μl、试剂ii200μl、标本20μl。反应时间5min。 　　2实验和结果 　　2.1线性范围 　　配制ASO浓度为1140U/ml的标准液，与生理盐水比例混合产生20U/ml，200UIml、400Ulml,800UIml,1140U/ml5个浓度。结果显示在20～800U/ml内呈线性。 　　2.2重复性实验 　　取低、中、高3种浓度的ASO血清，作批内和批间实验。结果见表1。表1ASO的重复性实验结果组别批内xSCV(略) 　　2.3回收实验 　　把ASO含量为463U/ml的血清分成4份，分别加入浓度为57U/ml、142．5U/ml、285U/ml和560U/ml的4个AS0标准液，按原血清2ml，加入标准液0．1ml的比例混和，回收率分别为100．3％，99．8％、99．2％、100．1％，总平均回收率为99．85％。其结果与回收率见表2。表2回收实验测定结果项目加入样本 浓度(略) 　　2.4相关性实验 　　 　　选取50例患者血清，先用乳胶凝集法检测，其中42例为阳性，8例为阴性：再用免疫透射比浊法检测，其中48例为阳性，2例为阴性。通过配对χ2检验，两种方法检测ASO的阳性率差异有统计学意义(Plt;0.05)。且乳胶法检测的42例阳性患者血清比浊法检测全部为阳性，且另6例比浊法检测阳性的标本均值为238.5±29.71，与正常人相比差异有统计学意义(t检验Plt;0．05)，表明免疫透射比浊法对AS0的检出率比乳胶凝集法高。 　　2.5干扰实验 　　2.5.1溶血的干扰 　　取末溶血的标本，测定ASO值，然后用物理方法使标本溶血，离心取上清液，用血常规仪检测出Hb含量为13.5g/L，再次检测，结果显示Hb为13.5g／L的血标本对AS0的检测有2.2％的干扰，而Hb在10g／L以下，即轻微的溶血对ASO的测定无明显于扰。 　　2.5.2脂血的干扰 　　用乳糜血标本，其中含甘油三脂浓度为14mmol/L，先对其测定ASO3次取平均值，然后加入一定量特定浓度的ASO标准液，测定3次取平均值进行计算比较，结果显示此浓度的乳糜血对ASO的检测无明显干扰，此时检测标本中甘油三脂的含量为12mmol／L，因此可以认为一般的脂血对ASO的测定不会有干扰。 　　2.5.3黄疸的干扰 　　在ASO333μmol／L标准液中加入等量浓度为600μmol／L的总胆红素标准液，再测定ASO理论值166.5U/ml,ASO实测值167U/ml,回收率100.3%,胆红素浓度值300U/ml,黄疸血清对ASO的检测无明显干扰。 　　2.5.4类风湿因子(RF)的干扰 　　在ASO浓度333U／ml标准液中加入2份浓度为450U／ml类风湿因子的标准液，测得ASO结果为112.3U／ml,显示浓度为300U/ml风湿因子对ASO的检测有1.2％的干扰，所以认为一般浓度的RF血清对ASO的检测无明显干扰。ASO理论值111U/ml,ASO实测值112.3U/ml,回收率101.2%,类风湿浓度值300U/ml。 　　2.6试剂稳定性 　　将9份ASO-I剂与1份ASO-II试剂混合即成工作液，置于2～8℃试剂箱，用来测定两种浓度的ASO质控液，测定30d，结果CVlt;5%,说明试剂在2～8℃可稳定30d。 　　3讨论 　　抗“O”主要是由A组β溶血性链球菌(GAS)感染机体后,体内针对其抗原溶血素O产生的相应的抗体，此抗体即为抗链球菌溶血素O(ASO)［1］，简称抗“O”。抗“O”没有保护机体的作用［2］，但检测抗“O”值增高提示有过溶血性链球菌感染,可以作为溶血性链球菌感染的间接证据，以及对各种风湿性疾病的预防、诊断、治疗和疗效观察具有重要意义。抗“O”常在GAS感染1wk后开始升高，3