广叶绣球菌子实体不同发育阶段的比较蛋白质组学分析探究.pdfVIP

食用菌学报@2016．23(3)：1～9 DOI：10．16488／j．cnki．1005～9873．2016．03．001 广叶绣球菌子实体不同发育阶段的比较蛋白质组学分析 肖冬来，马璐，应正河，江晓凌，林衍铨+ (福建省农业科学院食用菌研究所，福建福州350014) forrelativeandabsolute 摘要：利用同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags 结合二维液相色谱串联质谱(two．dimensional tandemmass LC．MS／ liquidchromatographyspectrometry，2D MS)技术，研究广叶绣球菌(Sparassislatifolia)原基期、幼菇期和成熟子实体阶段的差异表达蛋白质组。采用 Q—Exactive质谱鉴定并经ProteinPilot软件搜库，对所获得的差异蛋白进行GO(geneontology)、KEGG of and (kyotoencyclopedia genesgenomes)和转录因子注释分析。结果共鉴定到可信蛋白2305个，其中2219 个蛋白具有相对定量信息。与原基期相比，幼菇期显著上调蛋白104个，下调蛋白142个，子实体阶段显著上 调蛋白155个，下调蛋白460个。GO分子功能提示这些差异性蛋白主要参与催化活性、蛋白结合和水解酶活 性。KEGG代谢通路分析结果显示，差异蛋白主要涉及碳代谢、氨基酸合成、核糖体、糖酵解／糖衍生等代谢过 程。差异蛋白中与信号传导和转录因子相关的蛋白数量分别为27个和7个。 关键词：广叶绣球菌；蛋白质组；iTRAQ；二维液相色谱串联质谱 广叶绣球菌(Sparassis 用菌研究所首次在福建实现了广叶绣球菌的工厂化栽培。广叶绣球菌的研究，目前主要集中于生物学 特性、栽培、葡聚糖及其活性等方面口．6]，其中的B．葡聚糖能提高人体免疫力、具有抗癌、防癌特殊 功效‘4|。 原基的形成、子实体的成熟是人工栽培食用菌过程中重要的生理过程，因此大型食用菌子实体的 发育机制是食用真菌学研究的热点内容之一[7。0。。目前，关于广叶绣球菌子实体发育的分子机制及相 forrelativeandabsolute 关基因功能的研究尚未见报道。同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags liquid tandemmass LC．MS／Ms)技术已成功应用于多种生物样品的蛋白质组学分析，是目 spectrometry，2D 前比较蛋白质组学研究常用的方法之一[11|。笔者在前期完成广叶绣球菌菌丝体转录组测序(NCBI登 录号：SRR3318775)的基础上，采用iTRAQ结合2DLC．MS／MS技术对其子实体生长发育不同阶段的 蛋白质组进行分离鉴定及生物信息学分析，为探讨广叶绣球菌子实体发生、发育及成熟的机理提供 参考。 1材料与方法 1．1供试菌株 室保藏并提供。 1．2主要仪器及试剂 Ultimate3000 RSLCnano、Q RSLCC18 液相色谱仪Dionex Exactive质谱仪、Acclaim PepMap 收稿日期：2016—05—06原稿；2016—07—18修改稿 8)资助 作者简介：肖冬来(1981一)，男，2010年毕业于福建农林大学