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耐盐薄荷离体培养和植株再生探究 摘要：为研究耐盐薄荷的快速繁育技术，以耐盐的椒 样薄荷茎段为外植体，采用正交试验L4 （23）筛选其愈伤诱 导培养基。研究结果表明，NAA是影响耐盐薄荷诱导愈伤能 力的重要因素，其最适浓度为0. 2 mg/L,愈伤诱导率达92% 以上。在此基础上，通过扩大培养基中6-BA浓度进行不定 芽增殖培养基筛选，最终确定增殖培养基为2/3 MS+5. 0 mg/L 6-BA+0. 2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+4 g/L 琼脂，pH 值 6. 0 （灭 菌前）；此培养基下培养，增殖系数达19. 23O在诱导生根培 养基的筛选中，综合分析植株生长量（株髙）、生根数量（根 数）及根生长量（根长），确定生根培养基为1/2 MS+0. 2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+4 g/L 琼脂,pH 值 6.0。 关键词：椒样薄荷；离体培养；诱导；增殖；植株再生 土壤盐渍化问题是困扰农业生产的一大难题。当前，世 界上灌溉地面积约为230 Mhm2,其中遭盐害影响的土壤约占 45 Mhm2□旱地农业面积约为 1 500 Mhm2,其中遭盐害影响的土壤约占32 Mhm2□耕 地土壤盐渍化的退化面积正在以3 hm2/min的速度增长。据 FAO估计，世界范围内，每年因盐害丧失生产力的土地面积 达0. 25 M?0.50 Mhm2[l]o就我国而言，在1亿hm2耕地 中有667万hm2盐碱化土壤，另有0. 346亿hm2盐碱荒地 ［2］。随着人口的剧增及工业的高速发展，我国可耕地面积 急剧下降，同时，不合理灌溉又造成了大量良田的次生盐渍 化。 因此，开发和利用大面积盐渍化土地，利用耐盐植物资 源发展盐渍地生态农业十分必要。 耐盐薄荷是山东省科学院中日友好生物技术研究中心 经耐盐性试验筛选出的，系椒样薄荷(Mentha piperita L.) 的一种，耐受NaCl胁迫浓度为0.8%。耐盐薄荷除具有薄荷 的一般功效外，还因具有耐盐碱性而作为药赏两用植物逐渐 被关注。耐盐薄荷是水薄荷与绿薄荷杂交而成的一个不育性 中间类型，以分株繁殖为主。但长期采用无性繁殖，易发生 病害，引起品种退化和产量、质量下降［3, 4］。研究证明， 成熟完善的植物组织培养技术是解决品种退化和更新的有 效手段之一［5, 6］。因此，本研究以耐盐的椒样薄荷茎段为 外植体，对其离体培养及植株再生条件进行了研究，以期为 耐盐薄荷的品种改良和快速繁殖提供理论依据。 1材料与方法 1. 1试验材料 供试薄荷外植体取自山东省科学院生物中心中澳盐生 植物实验基地。 1.2试验方法 外植体灭菌从苗圃中取生长旺盛的薄荷植株，去叶 留茎和芽点，流水冲洗20 min后，用滤纸吸干水分，在超 净工作台上用75%酒精消毒 1 min、0. 1% HgC12溶液消毒8?10 min后，用无菌水 冲洗4?5遍，吸干水后用手术剪对外植体进行修剪，截取 长度2?3 cm的茎段，并将其接种在1/2 MS培养基中，置 于光照培养箱中培养。3 d后挑取无污染茎段转接至愈伤诱 导培养基中。 愈伤诱导培养基的筛选采用正交试验 L4 （23）筛选。选取上述培养的无菌苗，置于培养基中, 进行愈伤的诱导。培养30 d后，调查愈伤诱导率。愈伤诱 导率（%）二茎段愈伤形成个数/接种的茎段个数X100%o 不定芽增殖培养基的筛选取3 cm长的健壮无菌苗， 接种到不同浓度6-BA和NAA配比的2/3 MS培养基中，并添 加30 g/L蔗糖和4 g/L琼脂进行不定芽诱导。培养50 d （期 间转接1次）后，调查增殖系数。不定芽增殖系数（％）二不 定芽总数/接种的茎段数X 100%o 生根培养基的筛选取3 cm长的健壮无根苗，接种 到不同浓度6-BA和NAA配比的1/2 MS培养基中，并添加 30 g/L蔗糖和4 g/L琼脂进行生根诱导。培养2周后，统 计植株生长量（株高）、生根数量（根数）及根生长量（根 长），3周后进行比较分析。 培养条件以上每个处理各接种5瓶，每瓶5株，重 复5次。培养基pH值均为6.0 (灭菌前)，光照培养箱温度 (24±2) °C,生根光照时间12h/d (日光灯光照强度2 000 lx),其他光照时间14 h/do 对所得数据用SPSS 10.0软件包计算方差，对处理间进 行0.05水平上的差异显著性分析。 2结果与分析 2. 1愈伤诱导培养基的筛选 由表2可知，正交优选配方为A (1, 2) B1C2,即1/2 MS (2/3 MS) +1. 0 mg/L 6-BA+O. 2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖+4 g/L 琼脂。由R值可知，NAA (C)是重要因素，6-BA (B)是较 重要因素，MS (A)是影响较小因素，即影响因素CBAo因 此，通过该试验确定N