汉防己甲素滴眼液抑制角膜移植排斥反应的疗效及机制研究-眼科学专业论文.docxVIP

摘要 摘要 张悦 博士论文 汉防己甲素滴眼液抑制角膜移植 排斥反应的疗效及机制研究 专 业： 眼科学 学位申请人： 张悦 指导老师： 胡世兴教授 中山大学 中山眼科中心 摘要 角膜移植术后角膜植片出现免疫排斥反应是角膜移植术后最严重的并发症， 临床主要表现为移植片上皮受损、出现前房反应及虹膜炎表现、角膜实质层水肿 及狄氏膜皱褶，最终角膜植片失活，手术失败。角膜植片免疫排斥反应发生率约 为23％，其中年轻患者中较年老患者为高，当患者有多次移植史或术后大量新生 血管形成时，排斥反应的发生率则高达50％以上。 近年来，由于世界各国眼科学与器官移植科学研究人员、临床医师和生物学 科研人员的共l—J努力，使角膜植片免疫排斥反应的基础弓临床研究取得了巨大进 展，新的药物及治疗方法不断涌现，然而寻求有效、廉价、毒副作用小的治疗药 物仍是嗣扰眼科学界的难题之‘。随着显微手术技术不断提高、供体材料保存和 选择的完善，使角膜移植的适应症不断扩大，成为当今主要的复明手术之一，但 与此同时角膜移植术后植片免疫排斥反应的数量也日趋增加。以往应用的防治移 植排斥药物如硫唑嘌呤、氨甲喋呤、环磷酰胺和皮质类固醇激素等，它们虽具有 ／’‘泛的免疫抑制作用，但长期应用则产生严重的毒副作用。新近临床上抗植片免 疫排斥反应的局部应用药物主要有环孢霉素A(CsA)及FK506，但CsA的疏水性 药理特点使得其到达眼内(角膜内皮和色素膜)的浓度很低，限制了局部用药效 摘耍 摘耍 张悦 博E论文 果。FK506免疫抑制作用虽远强于CsA，并且已取得了明显的临床治疗效果，但 由于其价格昂贵，使得其临床长期应用难以得到普及。 汉防己甲素(Tetrandrine．Vet)又名粉防己碱，是从中草药粉防己的根块中提取 的双苄基异唾啉类生物碱，是粉防己的主要有效成分，早期研究表明汉防己甲素 具有消炎、镇痛、降压、抗纤维化等广泛药理作用。Tet可通过钙离子拮抗作用， 降低中性粒细胞内的钙离子浓度，降低ca”．Cam活性，一方面抑制PLA2活性， 减少前列腺素、白三烯、血栓素、血小板活化因子(PAY)等炎性介质释放；另一 方面Tet可丌高cAMP，减少溶酶体酶释放和氧自由基生成而发挥抗炎作用。除 此之外，眼科基础实验研究还证实Tet在抑制免疫性炎症、对抗增生性玻璃体视 网膜病变，抑制视网膜母细胞瘤肿瘤细胞增殖方面都有一定的作用。 本研究拟通过现代医学手段，将中药汉防己甲素滴眼液剂型应用于实验性角 膜移植术后，观察其抑制角膜植片免疫排斥反应的疗效，并探讨机制，从而为其 临床推广使用提供理论依据。 第一部分动物模型制各及汉防己甲素滴眼液有效治疗浓度的筛选 目的制各大鼠角膜移植免疫排斥反应动物模型，研究汉防己甲素滴眼液治疗角 膜移植免疫排斥反应效果，并确定其最佳治疗浓度。 方法建立SD—Wistar大 鼠角膜移植排斥反应模型，将实验动物分为5组。I组为正常眼组，II组为阴性 对照组(角膜移植术后应用1．O％甲基纤维素滴眼液)，111组为O．3％汉防己甲素 滴眼液治疗组，Iv组为0．5％汉防己甲素滴眼液治疗组，v组为I．0％汉防己甲素 滴眼液治疗组。对各组大鼠角膜植片存活情况、角膜透明性、角膜基质水肿情况、 新生血管进行评分比较。应用印迹细胞学(impression Cytology,IC)、HE、PAS染 色技术检测各组结膜杯状细胞情况，并进行比较。通过免疫组织化学HE染色技 术对各组角膜植片水肿情况进行比较，对角膜植片炎症细胞进行分类、计数，并 进行比较分析。结果1．O．3％、O．5％、1．O％汉防己甲素滴眼液治疗组角膜植片 中央出现新生血管的时间分别为18．14士2．55d、24．1 1土2．69d、21．31土2．47d与阴性 对照组12．00士2．12d相比，有显著性差异(PO．01)。各治疗组排斥反应指数 摘要 摘要 张悦 博士论文 (Rejection Index，Ri)均明显低于阴性对照组(尸O．01)。llI、IV、V组间比较，以 IV组RI为最低，并有显著性差异(PO．05)。2．术后角膜植片细胞类型主要包括： 淋巴细胞、异物巨细胞(吞噬细胞)及少量中性粒细胞。观察期间各时间点IlI、 IV、V组植片内淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞数量均少于II组。III、IV、v 组间比较，v组各类型炎症细胞数量少于lII、Iv组f尸o．05)。角膜植片与植床 交界手术缝线处可见大量异物巨噬细胞浸润。3．观察期间各时间点结膜杯状细 胞数量比较发现，lI、Il【、Iv、V组数量均少于I组(尸o．01)，Ill、IV、V组数 量均多于II组，III、IV、v组问比较以IV组数量为多，并有显著性差异(JD0．05)。 结论各治疗浓度汉防己甲素滴眼液对角膜移植术后免疫排斥反应均有一定的 抑制