光动力学疗法诱导细胞凋亡机制的初步研究-光学专业论文.docxVIP

中文摘要凋亡仅有线粒体通路参与，没有死亡受体通路的介入。通过FRET对由死亡受体 中文摘要 凋亡仅有线粒体通路参与，没有死亡受体通路的介入。通过FRET对由死亡受体 所引起caspase一3的活化动态过程进行监测发现，由死亡受体和caspase一8参与的 凋亡中，caspase一3的启动需要3小时以上。而在PDT诱导的凋亡中，无论是 caspase．3活化的启动还是caspase．3的激活的过程都比较迅速，不到20分钟就有 caspase．3被激活，而在15分钟内就完成了对SCAT3探针的切割过程。由此证明 了Photofrin．PDT诱导的凋亡由线粒体中介的；而在死亡受体和线粒体所介导的 凋亡中，caspase一3的活化的启动以及活化速度不同，由死亡受体所介导的 caspase一3的活化要慢于线粒体路径所介导的：线粒体是引起细胞凋亡最有效的 作用靶点。FRET技术还可运用于不同凋亡刺激下的不同凋亡通路所介导的凋亡 信号的传递的差异的研究。 在第三部分的实验工作中，主要介绍了FCLA和HpD的跨膜效率以及细胞内 定位的形态学研究初步结果，发现HpD和FCLA都可以有效地跨膜，并分布在 细胞质中。虽然FCLA与HpD的分子量大小相似，但是其进入肿瘤细胞的效率 却并不相同。与HpD相比，FCLA更易通过细胞膜，其在细胞质内的潴留量只 需要共培养30--45分钟就可达到最大。而npD则需要共培养20小时左右才达 到接近饱和。随着培养时间的继续延长直至48小时，细胞内光敏剂的潴留量没 有明显变化。实验中并未观测到FCLA和}如D进入细胞核的证据。该研究为利 用102和02-。探针FCLA动态观测细胞内102或02‘的产生和定位建立了实验基 础，并将推动在细胞或亚细胞水平上进行光动力学机制以及光敏过程引起细胞凋 亡机制的研究。 关键词： 光动力学疗法(PDT)；细胞凋亡；荧光共振能量转移(FRET)： Caspase-3；肿瘤坏死因子(TNF．ct)：FCLA II 茎茎塑至．————ABSTRACT 茎茎塑至．———— ABSTRACT Apoptosis is a very important cellular event that plays a key role in pathogeny and therapy of many diseases．Photodynamic therapy(PDT)is a new cancer treatmen‘ modality and attracts many countdes’attention．In response to photodynamic therapy (PDT)，apoptosis has been found to be a prominent form of cell death for many ceils in culture．The mechanisms of the initiation and regulation of apoptosis induced by PDT are complex and diverse．So we investigated the status and progress of the PDT induced apoptosis，we used FRET technique and a specific chemiluminescence probe (FCLA)to study PDT-induced apoptosis．The results are primary but significative， suggesting that they are feasible methods for studying the mechanism of PDT-induced apoptosis． In this paper，the base information of PDT and the mechanism of ablating tumor are introduced firstly,and the characteristicsand the regulation of apoptosis are given in details．In addition，the principle and the application of FRET technique are described． According to the former research，we have done the following work． In the first experimental study,we studied TNF-ct a