课件：第一节概述第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定.ppt

（一）化学法 基本步骤可归纳为四步 1.提取：甘油三脂的提取 采用合适的溶剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有： （1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。 （2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。 （3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。 2.皂化：甘油三脂的水解 一般都采用KOH乙醇或KOH异丙醇溶液，60℃，5～15min可使TG完全水解。 3.氧化：甘油的氧化 最常用的氧化剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受α-磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。 4.显色：显色测定甲醛。常用方法有： （1）甲醛与变色酸（4.5-二羟-2.7-萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。（570nm） （2）甲醛与乙酰丙酮在氨的存在下缩合成黄色的3.5-二乙酰-1.4-二氢-2.6-二甲基吡啶。（420nm） （二）酶法 常用的有： 1.磷酸甘油氧化酶法（GK-GPOD-POD法） TG ＋H2O 甘油 ＋ FA 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油 ＋ ADP 3-磷酸甘油 ＋ O2 磷酸二羟丙酮 ＋ H2O2 H2O2 ＋ 4-AAP ＋ 酚 红色亚胺醌 ＋ H2O 试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆红素、维生素C可消耗H2O2使结果偏低。 LPL GK GPOD POD THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 2.乳酸脱氢酶法（GK-PK-LDH 法） TG ＋ H2O 甘油 ＋ FA 甘油 ＋ ATP 3-磷酸甘油 ＋ ADP ADP ＋ 磷酸烯醇式丙酮酸 ATP ＋ 丙酮酸 丙酮酸 ＋ NADH＋H+ 乳酸 ＋ NAD+ 3.甘油氧化酶法 第一步消除血清中原有的甘油： LPL GPOD? PK LDH 游离甘油 ＋ O2 甘油醛 ＋ H2O2 GlyOD H2O2 ＋ EMAE 无色物质 EMAE称N-乙基-N-（3-甲基）-N-乙酰乙二胺。是一种还原剂，灵敏度比酚高。第二步测定甘油三脂水解释放的甘油： TG ＋H2O 甘油 ＋ FA ?甘油 ＋ O2 甘油醛 ＋ H2O2 H2O2 ＋ 4-AAP ＋ EMAE 有色化合物 POD GlyOD LPL POD 【参考范围】0.56～1.70mmol/L 【临床意义】血清TG一般随年龄增长而升高，体重超标者往往偏高。 1.病理性增高 原发性高脂蛋白血症、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊娠后期。 2.病理性降低 甲亢、肾上腺皮质功能减退、严重肝功能损伤。 四、血清（浆）脂蛋白测定 （一）血清脂蛋白电泳 临床实验室常用的支持介质有醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶。 1. 血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳 以醋酸纤维薄膜为支持介质，血清脂蛋白经电泳分离，然后用臭氧氧化，使脂蛋白中的不饱和脂肪酸的双键断裂生成醛，再用亚硫酸品红染色，即生成紫红色区带。 2. 血清脂蛋白预染琼脂糖电泳 血清脂蛋白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，进行电泳分离，即可得到清晰的兰色区带。 凝胶浓度一般为0.5%，超过1%，β-Lp与preβ-Lp不易分开，＜0.5%，凝胶机械强度太低。 血清：染料为9：1，染料过多稀释标本，而且染料中乙醇会引起蛋白质变性，影响分离效果。 结果判断，直观区带的着色深浅，宽窄，用浅染，稍浅染，深染及消失加以描述；或用光密度扫描仪测定。 【参考范围】 α-Lp 30%～40% preβ-Lp 13%～25%