机械力对骶韧带成纤维细胞形态及合成功能的调节-妇产科学专业论文.docxVIP

中文摘要机械力对骶韧带成纤维细胞形态及合成功能的调节 中文摘要 机械力对骶韧带成纤维细胞形态及合成功能的调节 摘 要 目的：女性盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse，POP)是盆底支持组织 因退化、损伤等导致肌肉韧带松弛而引发的一类疾病。其病因学还不十分 清楚，研究【1】多指向I型胶原、III型胶原、MMP、TIMP等细胞外基质成分 的改变，认为细胞外基质重塑引起组织力学性能的下降是该病的关键因 素。所以本研究旨在： 1研究机械力对非POP患者骶韧带成纤维细胞形态及整合素pl (integrinl]1)、Talin、I、III型胶原、基质金属蛋白酶．1(matrix metalloproteinase．1，MMP．1)mRNA表达的调节。 2研究机械力与细胞外基质重塑的关系。 3探究机械力在女性盆腔器官脱垂(pelvic organ prolapse，POP)发病机制 中的作用。 方法： 1研究对象：选取2009年10月．2010年9月在河北医大二院因非POP(恶 性肿瘤除外)行子宫切除手术患者的骶韧带15例，平均年龄49．6±4．26 岁，产次2．73±1．27次，体重指数24．75--+2．44kg／m2。所有入选者均无结缔 组织疾病，术后病理证实为非子宫内膜异位症、非卵巢内分泌性肿瘤等雌 激素相关疾病，剔除急慢性盆腔炎和盆腔炎后遗症的患者，剔除有该部位 手术史者及近3个月内有雌激素应用史者。 2取材：经河北医科大学第二医院伦理委员会同意，所有患者签署知情同 意书。所取标本为骶韧带近宫颈部分，筋膜外子宫全切时留取约5mm左 右的骶韧带组织，4C冷盒送实验室，整个取材运输过程小于2小时。整 个取材过程要求严格无菌。 3成纤维细胞的原代培养和鉴定：采用胶原酶消化法和组织块法进行骶韧 带成纤维细胞的原代培养，倒置相差显微镜进行细胞形态学观察，免疫细 胞化学染色进行细胞鉴定。 4细胞力学实验：采用Flexcercell4000柔性基底拉伸加载系统，选取15 例3--．,4代指数生长期的骶韧带成纤维细胞通过flexcell．4000柔性基底加 中文摘要载系统加载、加力，加载过程在二氧化碳培养箱内进行。实验样本培养于 中文摘要 载系统加载、加力，加载过程在二氧化碳培养箱内进行。实验样本培养于 特制的一次性六孔BioFlex培养板上，材质为可变形的硅胶柔性膜，其上 包被有collagen I。加载程序由Flexcercell4000计算机软件自动控制。加 载参数：幅度10％，正弦波，0．5Hz，加载时间分为0、4、15、24h，以 不加力0小时为对照组，卸载后立即提取RNA，采用荧光实时定量PCR 测量机械力对integrin 13 1、talin、I、III型胶原、基质金属蛋白酶．1(matrix metalloproteinase．1，MMP．1)mRNA表达量的影响。 结果： 1所培养细胞为成纤维细胞，光镜下细胞以梭形为主，也可见到不规则三 角形、多角形等各种形状的细胞，并彼此连接成网状。免疫组织化学染色 中间丝波形蛋白(vimentin)阳性，细胞纯度90．4％，平滑肌肌动蛋白(Q ．SMA)染色约8．3％1jB性率，角蛋白(cytokeratin)染色阴性。 2应力作用后，细胞的形态和伸展方向发生改变；拉伸前细胞形态多样， 梭形为主，也可见到不规则三角形、多角形等各种形状的细胞，并彼此连 接成网状，向各个方向伸展；拉伸4h、15h、24h后细胞均为长梭形，并 垂直于最大应变方向取向，以24小时最明显。 3荧光实时定量PCR结果：应力作用下，integrinl31 mRNA4h、15h、24h 表达量(18．822±0．500，32．527±2．559，40．357__．2．140)较Oh(1．008±0．059) 显著升高，各组间差异均有统计学意义，p0．01；talin mRNA 4h、15h、 24h表达量(109．8044-4．861，106．574±35．477，863．206__+44．298)较O小时 (1．009±0．468)显著升高，4h、15h差异无统计学意义，p0．05，余各 组间差异均有统计学意义，p0．01；I型胶原mRNA 4h、15h表达量(O．753 ±O．075，0．701±0．023)较Oh(1．000±O．129)下降，差异有统计学意义， p0．01，加载力24hmRNA表达量(1．113±0．049)回升，与Oh差异无统 计学意义，p0．05；III型胶原mRNA4h、15h、24h表达量(4．792±0．036， 6．146±0．594，5．021±O．594)较Oh(1．000±0．249)显著升高，24h与4h 差异无统计学意义，余各组间差异有统计学意义，p