吉非替尼衍生物对胶质瘤增殖影响的研究-外科学(神外)专业论文.docxVIP

贵阳医学院 贵阳医学院 2012 届硕士研究生论文 吉非替尼衍生物对胶质瘤增殖影响的研究 PAGE PAGE 10 吉非替尼衍生物对胶质瘤增殖影响的研究 专业名称 神经 外科学 研 究 生 刘来 兵 导 师 刘 健 教授 杨 华 教授 摘 要 目的：采用吉非替 尼 衍生物 体外干预 胶质 瘤细胞，以 期为临 床 治疗该类 疾 病探索一 种更有 效的 新的药物。方法 ：①手 术切除胶 质瘤患 者的 病灶组 织， 采用机械 分离法 获取 胶质瘤细 胞，通 过差 速贴壁、反复传 代 、自然纯化 法 纯化， 获 得 纯 度 高 、 生 物 性 状 稳 定 、 增 殖 能 力 强 的 细 胞 株 ， 通 过 免疫组化 技术鉴定原代细胞及其纯度；②以 15 种吉 非替尼衍 生物、 吉非 替尼 及替 莫 唑胺 三 类 药 物 分 别 干预 胶 质 瘤 细 胞 ， 每 种 药 物 均以 0μmol/L、10μmol/L、 15μmol/L、20μmol/L、25μmol/L、30μmol/L 共六种浓度干预肿瘤细胞后行 MTT 比色法测药物抑制率；③参照 MTT 比色法测出的药物抑制率，筛选抑制率较高 的吉非替尼衍生物药物；④计算药物 IC50(半抑制浓度)，选择 IC50 较低的吉非 替尼衍生 物、吉 非替 尼与替莫 唑胺以 10μmol/L、20μmol/L、30μmol/L 干预细 胞后，采用流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡；选择凋亡明显的吉非 替尼衍 生物 和 吉 非 替 尼 采用蛋白印迹技术检测药物干预后肿瘤细胞磷酸化的表 皮 生 长 因 子受体（ p-EGFR）含 量的表达 。结果 ：①培养成功 的原代 细胞 用 GFAP 鉴 定，细胞染 色为阳 性 ，胞浆内呈 棕黄色 颗 粒，阳性率 达 93%左右；② MTT 比色法示细胞生长抑制率显示：吉非替尼衍生物（LPY-5、9、11 号）能有效的 抑制细胞的生长，抑制率依赖浓度，药物抑制率与浓度成正相关，药物抑制率随 浓度升高而增加；其他吉非替尼衍生物药物抑制率与浓度不成正相关；③IC50 结果：吉非替尼衍生物（LPY-9 号药物）IC50 低于 5 号药物，两者 IC50 均低于 吉非替尼 及替莫 唑胺 ；吉非替尼衍生物（LPY-11 号药物）IC50 高于吉非替尼 及替莫唑 胺。④流式细胞术检测细胞凋亡结果：吉非替尼衍生物（LPY-5、9 号） 的细胞凋亡率均高于吉非替尼和替莫唑胺，而吉非替尼衍生物（LPY-9 号）的细 胞凋亡率明显高于 5 号。⑤蛋白印迹 技术显 示：吉非替 尼衍生 物（LPY-9 号） 和吉非替 尼干预 肿瘤 细胞 后 p-EGFR 的表 达量均低 于阴性 对照 组， 而吉非 替尼衍生物 （LPY-9 号）表达量降低较 吉非替尼 明显 。 结论： 机械分离 细 胞法是一 种简便 、成 功率 较高 的体外 胶质 瘤细胞培养方法 ，通 过此方法 可 以建立理 想的胶 质瘤 体外实验 模型。 吉非替尼衍生物（LPY-9 号）在体外对 胶质瘤细 胞有明显抑 制作用 ，其抑 制作用 明显高于 吉非替 尼和 替莫唑胺 值 得进一步 研究 。吉非替尼衍生物（LPY-9 号）对胶质瘤 的抑制 作 用可能 是通 过抑制 ERFR 介导的 信号传导 通路和 促进 胶质瘤细 胞凋亡 来 实现的。吉非 替尼衍生物（LPY-9 号）在体内对胶质瘤的效果值得进一步探索。本实验为下 一步的动 物实验 提供 一定的依据。 关键词：人胶质瘤细胞、吉非替尼、吉非替尼衍生物、细胞凋亡 前 言 脑胶质瘤是发生于神经外胚层的恶性肿瘤，是 颅脑肿瘤中最常见的一 种，约占所有颅内肿瘤的45%左右。胶质瘤在成人中的发病率约为6/10万， 5年生存率20%~30%左右[1-2]，部分胶质瘤恶性程度高，生长速度快，病人 生存期短，复发率高，治疗困难，总体预后差，是全身肿瘤中预后最差的肿 瘤之一，严重危害人类的健康，其治疗一直是神经外科领域研 究的热点。 传统胶质 瘤的治 疗方 案是手术 切除大 部分 病灶 组织 ，术 后采用 多种方 法消灭残 存的胶 质瘤 细胞 。当 前胶质 瘤的 治疗方法 及进展 有以 下几方面 ： 1、手术 治疗， 传统 的手术治 疗，难 以将 病灶完全 切除， 近年 来利用神经 导航技术 ，为手 术提 供了实时 精确定 位，明显提高 了手术 的切 除率，减少 盲目性探 查对正 常脑 组织的损 伤，大 大降 低术中对 重要脑 组织 的 损伤，尽 量安全的 完全切 除肿 瘤组织 。Nimsky C等[3]报道, 术中 利用神 经 系统导航 , 可以做到 对胶质 瘤的 全切而并 发症发 生率 极低 ，但是一 方面对 于某些关 键 功能区或 者与重 要神 经、血管 关系紧 密的 肿