课件：实验诊断实验.ppt

Red Blood Cells , 红细胞 Red Blood Cells ,异常红细胞 White Blood Cells , 白细胞 Hyaline Casts， 透明管型 Cellular Casts，细胞管型 Granular Casts，颗粒管型 THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 实验三 白细胞分类计数 一 实验目的：掌握白细胞分类计数原理和方法，熟悉白细胞分类计数的参考值及临床意义。 二 实验原理：白细胞的胞质、胞核和胞桨颗粒等含有不同的化学成分，其与各种染料的亲和力不同。经染色后能着上不同的颜色，根据颜色的差异，可将白细胞区别并进行分类计数。 三 实验器材和试剂：显微镜 擦镜纸 75 ％酒精 推玻片 吸水纸 消毒干棉球 载玻片 染色架 瑞氏染色液 采血针 香柏油 缓冲液 吸球 二甲苯 四 实验步骤：1.血涂片制备-- 取末梢血一滴，置于载玻片一端，将推片的一端，放在血滴前面，逐渐后移接触血滴，血滴好沿推片散开，然后使推片与载玻片间成30°～45°夹角，平稳向前推动至载玻片的另一端，玻片上便留下一均匀薄层血膜，自然干燥。 2. 染色--①将干燥后的血膜片置于染色架上。 ②用瑞氏染液3～5滴，覆盖整个血膜，固定细胞0.5～1min。 ③滴加等量或稍多的缓冲液于血膜上，用吸球将其吹匀，染色5～10min。 ④平放玻片，用流水从玻片的一侧冲去染液，待血片自然干燥或用滤纸吸干，即可镜检。 3.镜检--在低倍镜下观察细胞着色情况，然后选择血涂片体尾交界部染色良好的区域滴加一滴香柏油，在油镜下按一定的方向顺序对所见到的每一个白细胞进行分类，既不得重复亦不遗漏，共计数100个白细胞。求出各类白细胞所占的百分率。 　　　 瑞氏染色外周血五种白细胞形态特征： 细胞类型 大小（μm） 外形 细胞核 细胞质 核形 染色质 着色 颗粒 中性杆状核粒细胞 10～15 圆形 弯曲呈腊肠样，两端钝圆 深紫红色粗糙 淡橘红色 量多，细小，均匀布满胞质，浅紫红色 中性分叶核粒细胞 10～15 圆形 分为2～5叶，以3叶为多 深紫红色粗糙 淡橘红色 量多，细小，均匀布满胞质，浅紫红色 嗜酸性粒细胞 11～16 圆形 分为2叶，呈眼镜样 深紫红色粗糙 淡橘红色 量多粗大，圆而均匀，充满胞质，鲜橘红色 嗜碱性粒细胞 10～12 圆形 核结构不清，分叶不明显 粗而不匀 淡橘红色 量少，大小和分布不均，常覆盖核上，蓝黑色 淋巴细胞 6～15 圆形或椭圆形 圆形或椭圆形，着边 深紫红色块粗糙 透明淡蓝色 小淋巴细胞一般无颗粒，大淋巴细胞可有少量粗大不均匀，深紫红色颗粒 单核细胞 10～20 圆形或不规则形 不规则形，肾形，马蹄形，或扭曲折叠 淡紫红色，细致疏松呈网状 淡灰蓝色 量多细小，灰尘样紫红色颗粒弥散分布于胞质中 中性杆状核粒细胞 中性分叶核粒细胞 淋巴细胞 单核细胞 嗜碱性粒细胞 嗜酸性粒细胞 外周血各类白细胞的百分率及绝对值 血涂片的制备 五 注意事项： 1.所制血膜片一定要均匀，厚薄适宜，头、体、尾分明。 2.玻片需清洁，血膜干透后才可固定染色。 3.染色时间的长短与染液的浓度、室温高低及有核细胞多少有关。染液浓度愈小、室温愈低、细胞愈多、所需时间愈长。必要时可增加染液量或延长时间。 4.染液不宜过少，以免蒸发干燥，导致染料沾着于血膜上不易冲掉。 5.冲洗时不可先倒掉染液，应让流水从血膜一端缓缓将染液冲去，以免染料残渣附在血膜上。 六 思考题： 白细胞分类计数的临床意义？ 实验四 网织红细胞计数 一 实验目的： 熟悉网织红细胞计数的原理和测定方法，掌握网织红细胞参考值及临床意义。 二 实验原理： 网织红细胞是尚未完全成熟的红细胞，其胞质中含有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质，经新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构，可区别于完全成熟的红细胞。 三 实验器材和试剂：显微镜、10g/l新亚甲蓝染液，试管、载玻片、香柏油 四 实验步骤： 1. 取小试管1支加10g/l新亚甲蓝染液1滴。 2. 加入血液1滴于上述试管中，混匀。 3. 室温下放置10－15分钟后，取1滴制成血膜片。 4. 在低倍镜下选择细胞分布均匀，着色清晰的部位，用油镜计数1000个红细胞内网织红细胞数。 五 计算：网织红细胞百分数＝网织红细胞数/1000 六 参考值： 成人：0.005-0.015 (0.5%～1.5%)