火绒草抗乙肝作用及其作用机制的初步研究-生物化学与分子生物学专业论文.docxVIP

Anti-Hepatitis B Virus Effect and Possible Mechanism of Action of Edelweiss (Leontopodium leontopodioides) By Linghao Dai A Dissertation Submitted to China Jiliang University In partial fulfillment of the requirement For the degree of Master of Science China Jiliang University June, 2015 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的 研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得 中国计量学院 或其他教育机构的学 位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在 论文中作了明确的说明并表示了谢意。 学位论文作者签名： 签字日期： 年 月 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 中国计量学院 有关保留、使用学位论文的规 定。特授权 中国计量学院 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。同 意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。（保密的学位论文在解 密后适用本授权说明） 学位论文作者签名： 导师签名： 签字日期： 年 月 日 签字日期： 年 月 日 致 谢 本论文是在导师伍义行教授的指导和帮助下完成的，从论文选题到实验设计 都倾注了伍老师很多心血。感谢他在科研工作中对我的悉心培养和教诲，他敏捷 的思维方式、严谨的治学态度以及虚怀若谷的人生理念将使我终生受益。他的教 诲将激励我在今后的工作、生活和学习中不畏困难，勇往直前。在此向伍老师表 示深深的感谢与崇高的敬意。 感谢生命科学学院的各位领导和老师的关心和帮助。感谢在我完成毕业论文 期间张永勇老师、胡华军老师学习中给予的热心帮助和耐心指导。 感谢2012级生物化学与分子生物学专业的同学们在生活和学习中给予的关 心和帮助，同时还要感谢沈玉明师兄、张虹莉师姐、糜怡珺、陈洁晶等同学在实 验中给予的帮助与支持。 借此机会，我还要对那些未在此提及的老师、同学和朋友们的关心和帮助表 示诚挚的谢意。 特别感谢我的父母和亲人，他们长期以来对我的支持与鼓励，使我能够全身 心的投入到研究学习中，顺利完成学业。 衷心感谢论文评阅和答辩委员会的所有专家。 最后，我再一次向所有曾经关心、帮助和支持我的人致以最诚挚的谢意。 戴灵豪 2015 年 6 月 火绒草抗乙肝作用及其作用机制的初步研究 摘要：乙型病毒性肝炎是由乙肝病毒（HBV）感染引起的一种威胁公共健康的社 会性传染病，而我国是HBV感染高发地区，但至今尚无根治的药物和方法，因 此，加强抗乙肝药物研制仍是当务之急。现有抗乙肝药物主要包括干扰素和核苷 类似物，由于存在严重的耐药性和副作用等问题，限制了患者的选择。而菊科火 绒草属植物火绒草[Leontopodium leontopodioides (Willd.) Beauv.]作为一种资源 丰富的民间草药，广泛用于肝炎等各种炎症性疾病的治疗，取得了较好疗效。因 此，开展火绒草抗肝炎的现代研究具有重要意义。 本课题第一部分：在前期研究的基础上，采用浸提法提取火绒草的主要活性 组分，采用凝胶和硅胶层析等手段对提取物进行了分离纯化，并采用HPLC等手 段对提取物进行了初步分析。第二部分：选择其中一种提取物作为研究对象，运 用HBV转基因细胞和HBV转基因小鼠分别研究其体外和体内抗乙肝作用；同时， 分析比较了抗乙肝潜在靶点血红素加氧酶-1（HO-1）在三种不同类型肝细胞中 的差异表达，并探讨了该提取物对HO-1基因表达的影响。 一、火绒草的提取分离及抗乙肝活性研究 1．火绒草的提取分离及定量分析 选取火绒草干燥药材，采用甲醇室温浸提法提取，将提取液浓缩成浸膏，经 萃取获得正丁醇部位。该部位通过凝胶和反相硅胶柱层析分离纯化，最后分离得 到实验所需的火绒草提取物。采用 HPLC 方法对该提取物进行了分析，同时，采 用三氯化铁-铁氰化钾显色法测定该提取物的总酚酸含量为 10.27%。 2．火绒草提取物的抗乙肝活性的研究 体外抗 HBV 作用研究：以转染 HBV 基因的 HepG2.2.15 细胞作为抗 HBV 体外评价模型，以拉米夫定作为阳性药物。火绒草提取物作用细胞 3 天后，采用 酶联免疫法检测细胞培养上清中抗原（HBsAg 和 HBeAg）含量变化；给药 6 天 后除检测抗原水平外，以荧光定量 PCR 法检测 HBV