黄瓜花叶病毒2b基因及其与卫星RNA互作研究-微生物专业毕业论文.docx

致 致 谢 本论文是在导师陈朵双教投鑫心指li--r竞文的。致此论文完茂之际．谨向导 坪罗年采在学习．工作和生话上给予曲关心和鼓励表示衷心曲氨谢·论文从选 题．截计和结景分析到论文撰写与修改，都嵌素蓍导师曲心^和智慧。导师开阔 的视野．渊博的学识．严谨的话学态度，忘我的冀丘热忱曝曝地彰响了我．使我 受重终生，导坪宽厚待人风格是我永远的楷模，精重求精的学术态度是我学习曲 耪样。 本论文所有工作都是在晰江理工土学生物工程研霓所完崴，感谢生物工程研 究所给我提供了好的实验条件和杖术平台，为本人碍霓的峨翻开展奠定了坚实 舂础，感谢生物工程研究所所有老师在实验过程．P提供的帮助和便稍，感谢募格 王作物碍究所力一d《t麟I赦投捉供一部分实玲材料，感谢浙江土学同学，师兄弟熔 在日帚生活与实验过程_P的关心和篮殿。威谢理工土师弟昧们在实蘑上的无私章 助，本论文的宽崴也同拜是囊结着慷们的王点滴谪，感谢晰江理工大学曲朋友们 是你们让我发统下沙是J,此i6令人留悫。众多人无微不至的关杯与鼓励时刘激励 着我，伴随我博士论文章章节节的宄成， 同时或激我的家人速当年拳在学习．生话．精神上恰于的摹土支持，理解和 鼓励，是他们无穷无尽的巷爱和不知疲倦的操劳件着我走到了今天。 罩后向参加本论文答辩的套体专家致以最诚挚的谢t／ 廖乾生 二零零七年一一 于梳州 浙江大学博士论文摘要 浙江大学博士论文 摘要 黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaic协∞，CMV)作为典型的+ssRNA病毒，是 寄主最多、分布最广、对农作物危害最为严重的植物病毒之一；由于基因组分布 在3条RNA分子，基因组结构简单，CMV是研究RNA病毒致病机制的模式病 毒之一。本论文就CMV的2b基因与satRNA互作进行以下方面的研究： 1． 黄瓜花叶病毒褪绿分离物基因组全长克隆及侵染性克隆构建 杭州郊区的辣椒样品经ELISA检测和SDS．PAGE病毒粒子分析，结果表明： 引起大田辣椒产生褪绿黄化症状的病原物为黄瓜花叶病毒(Cucumber mosa耙 v／rus，CMV)，CMV-Phy。CMV-Phy病毒粒子RNA分析发现该CMV携带satRNA (satellite RNA,satRNA)。将辣椒样品汁液摩擦接种于心叶烟，接种14 d(days post-inoculation,dpi)所引起的症状与CMV-Phy症状相似。 以病毒粒子的RNA为模板，在一个RT-PCR反应中通过升温PCR同时获得 CMV-Phy基因组RNAl、RNA2和RNA3的eDNA。5种感受态细胞与CMV-Phy 基因组cDNA连接产物(pUC-PI、pUC-P2和pUGP3)进行转化结果表明：HBl01 最适合CMV-Phy的转化。测序结果显示pUC-P1、pUC-P2和pUC-P3大小分别 为：3356nt(nucleofide,nt)，3048nt和2220nt(序列登陆号分别为：DQ402477， DQ41273和DQ412732)。CMV-Phy所携带的satRNA的大小为384nt(Pz-satRNA， 序列登陆号：EF363688)．CMV-Phy基因组RNAI、KNA2和RNA3与已报道其 它CMV株系序列同源性结果表明．．cMv=-PhyRNAI和RNA2属于Subgroup IA， 而RNA3为Subgroup IB。因此，CMV-Phy为重组型病毒。 CMV-Phy基因组eDNA克隆在5’端添加G体外转录时有利于提高转录效 率，但会降低其侵染活性。CMV-Phy基因组体外转录RNA在苋色藜和心叶烟产 生的症状与其病毒粒子所产生的症状相一致。CMV-Phy转录产物与其它3个 CMV-satI悄A(Rs-satRNA，Tl-satRNA和Yi·satRNA)进行假重组，结果表明： CMV-Phy除了支持自身携带Pz-satRNA在心叶烟上高含量的积累，同时也能支 持其它3个CMV-satRNA在心叶烟上积累，TlsatRNA加重CMV-Phy在寄主上 的症状，但其它的3个RNA减轻CMV-Phy在寄主上的症状。 浙江大学博士论文2．2b蛋白第55位亮氨酸决定CMV-CB7在心叶烟上系统性坏死 浙江大学博士论文 2．2b蛋白第55位亮氨酸决定CMV-CB7在心叶烟上系统性坏死 CMV番茄株系(cMv-cB7)在心叶烟上引起系统性坏死反应。CMV-CB7 基因组RNAI，RNA2和RNA3大小分别为3356 nt，3045 nt和2218 nt(序列登 陆号：EF216866、DQ785470和EF216867)。CMV-CB7基因组cDNA克隆体外 转录产物在心叶烟上同样产生系统性坏死症状。由CMV-CB7和CMV-Fny基因 组产生假重组病毒C1C2F3，ClP2C3