抗戾饮对呼吸道冠状病毒感染模型影响的实验研究-中医临床基础专业毕业论文.docx

Ad3、FMl)均无明显的治疗作用。 Ad3、FMl)均无明显的治疗作用。 二抗戾饮对呼吸道冠状病毒体内感染模型的影响 1呼吸道冠状病毒旧V的增殖与鉴定 目的：建立可靠的IBV鉴定和诊断方法。方法：1、首先将IBV-M41接种于94 10日龄鸡胚绒毛尿囊腔，37。C孵育，48h后收获。2、用鸡胚矮小化实验及对新成疫 病毒B1株(Newcastle Disease Virus，NDV-B0的干扰实验初步鉴定IBV。3、参照 GeneBank注册的IBV-M41全序列，设计一对跨越N基因及3’末端UTR基因序列 的引物，对鸡胚尿囊液中IBV进行RT-PCR鉴定。结果：鸡胚矮化及干扰实验均成阳 性，初步鉴定IBV的存在。尿囊液RT-PCR成功扩增出IBV N基因特异条带，其大 小与预计相吻合。结论：鸡胚矮化实验及鸡胚干扰实验等方法，在鉴定IBV毒株方面 具有一定的参考价值。基于IBV病毒基因组设计的引物对鉴定IBV有较好的特异性， 是鉴定|BV的一种较准确、快速的方法，具有一定通用性。 2呼吸道冠状病毒IBV感染雏鸡模型研究 目的：建立IBV感染雏鸡的发病模型。方法：利用滴鼻、点眼方法将呼吸型IBV-M41 接种7目龄雏鸡，对照组接种生理盐水，然后置于具有可调控的低温高湿环境中饲养。 观察雏鸡发病的一般症状、呼吸道症状、体重、肛温，并将出现临床症状的雏鸡剖杀， 观察支气管及肺病理改变。参照GeneBank注册的IBV-M41全序列，设计一对跨越 N基因及3’末端UTR基因序列的引物，对雏鸡肺及支气管组织中IBV进行RT-PCR 鉴定。结果：接种IBV后，在低温及潮湿环境的刺激下，雏鸡表现有体温逐渐升高致 高热、喷嚏、咳嗽、呼吸罗音、呼吸困难及食欲不振、便溏、萎靡不振、昏睡等临床 表现。病理上表现为典型的肺与支气管病交的支气管炎病症。组织RT-PCR成功扩增 出IBV N基因特异条带，其大小与预计相吻合。结论：利用呼吸型IBV-M41标准毒 株加模拟发病模型环境(寒冷刺激加潮湿环境)，可以成功复制出IBV雏鸡感染模型。 该模型在一定程度上还符合呼吸道病毒感染所引起的中医证候(湿热壅滞、肺失宣降) 的特点。 3抗戾饮对人工致雏鸡感染呼吸道冠状病毒感染的影响研究 目的：研究抗庆饮对IBV感染雏鸡中医证候改善情况，并评价抗戾饮对旧V模型 组织中IBV N基因相对表达量的影响及对IBV抗体生成的影响。方法：利用滴鼻、点 眼方式接种IBV的7日龄雏鸡分层随机分为5组：模型组，治疗组(抗戾饮高、中、 低三个剂量组)，阳性对照组(更昔洛韦组)，另设用生理盐水接种7日龄的雏鸡为空白 对照组。将所有攻毒组与生理盐水组雏鸡隔离放置在可调控的低温高湿环境中。从攻 毒后第1d开始，分别灌胃给予模型组、空白对照组无菌生理盐水，治疗组高、中、 低剂量组分别每天每只给予抗戾饮水煎剂109／kg、209／kg、409／kg，阳性对照组每天 低剂量组分别每天每只给予抗戾饮水煎剂109／kg、209／kg、409／kg，阳性对照组每天 每只给予更昔洛韦0．0049／kg。实验时间为5～7d。(1)观察IBV感染模型临床症状、 体温变化及死亡率。(2)参照GeneBank注册的IBV-M41全序列及其N基因序列， 以及小鸡细胞质13一actin基因序列，设计两对实时荧光定量PCR引物。实验结束后， 运用实时荧光定量PCR方法检测各组雏鸡组织(肺及支气管)中IBV的N基因相对 表达量的变化。并对各实验组的肺及支气管组织作病理学检查。(3)实验结束后，采 用ELISA方法检测各组雏鸡血清中IBV抗体含量。结果：(1)与模型组相比，抗戾 饮各组均能显著降低IBV模型升高的体温，使体温恢复正常，同时明显改善IBV模型 的一般症状和呼吸道症状，降低模型死亡率。(2)与模型组相比，抗戾饮能显著降低 模型组织中IBV N基因的相对表达量。并能改善旧V模型肺与支气管组织的病理学变 化。(3)与空白对照组相比，IBV模型组血清中旧V抗体滴度虽然显著增加，但依然 为阴性。与模型组比较，抗戾饮组的血清IBV抗体的滴度升高明显。其中抗戾饮低剂 量组的抗体依然为阴性，而中高剂量组均为抗体阳性。结论：抗戾饮对人工致雏鸡旧V 感染模型具有抑制病毒体内复制、改善一般症状和呼吸道症状、降低体温、改善中医 证候、降低感染雏鸡死亡率的作用。同时抗戾饮对IBV模型的气管及肺组织的病理损 伤有修复作用，并能提高模型血清中IBV抗体滴度，从而提高雏鸡抗病康复能力，这 可能是抗戾饮治疗IBV感染模型有效的主要原因之一。 本课题具有一定的特色和创新性：首先是冠状病毒体内感染模型的建立。本模型 在我国卫生部颁布的抗病毒药物药效学内容中未曾述及，因此建立IBV替代 SARS—CoV复制呼吸道冠状病毒体内模型，将填