米根霉利用五、六碳糖共发酵产L乳酸的研究-食品科学专业毕业论文.docxVIP

独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表 或撰写过的研究成果，也不包含为获得 合肥工业大学 或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确 的说明并表示谢意。 学位论文作者签名：赢锚 签字日期： 沙ff年≥月哆日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解 金目巴工些太堂 有关保留、使用学位论文的规定，有权 保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人 授权 金起王些太堂 可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可 以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。 (保密的学位论文在解密后适用本授权书) 学位论文作者签名’： 亩饶 导师签名： 签字日期：wIf年≥月l乡日 签字日期： 日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 电话： 通讯地由E： 邮编： 米根霉利用五、六碳糖共发酵产L．乳酸的研究 米根霉利用五、六碳糖共发酵产L．乳酸的研究 摘 要 乳酸是21世纪最具发展潜力的有机酸之一，L．乳酸以其具有的独特构型优 势展示了广泛的应用前景。随着石油资源的枯竭和新型环保材料——聚乳酸需 求量的日益增加，人们正在努力寻找替代石油燃料的新能源和降低L．乳酸生产 成本的新原料。包括林木、农作物秸秆及农副产品下脚料等在内的植物纤维原 料是地球上产量最大的可再生资源，在自然生态系统的能量流与物质循环中占 有重要的地位。本文以植物纤维水解主要成分——葡萄糖和木糖为原料，通过 N+注入诱变和定向选育筛选L．乳酸高产突变株，采用响应面法优化摇瓶发酵条 件，初步探究高产突变株利用五、六碳糖共发酵产L．乳酸的发酵机理，建立菌 体生长和产物生成动力学模型。主要结论如下： 1)经不同剂量的N+注入后，菌株的存活率曲线呈典型的“马鞍型；综合 考虑注入剂量对菌株存活率与突变率的影响，在离子能量为15 KeV时，N+注 入该米根霉菌株的最佳诱变剂量为50x2．5x10¨ions／emz。 2)采用最佳注入剂量筛选，最终得到一株产酸性能优良且遗传特征稳定的 突变株N50．7，该菌株以葡萄糖、木糖为碳源，发酵72h的L-乳酸产量为 79．46 g／L，较同批发酵的原始菌株的发酵周期缩短了36 h，L．乳酸产量提高了 18．02％。 3)在单因素试验的基础上，结合响应面法优化获得突变株NS0—7发酵产 L．乳酸的培养基组成和培养条件。最佳发酵条件为：葡萄糖100 g／L，木糖50 g／L， (NH4)2SOa3．0 g／L，KH2P040．3 g／L，MgSOa。7H20 0．3 g／L，ZnS04‘7H20 0．4 g／L， 摇床转速180 r／min，温度32C，接种量12％，装液量50 mL，该条件下发酵 72 h，L．乳酸产量可达1 19．178 g／L。 4)发酵过程中的酶活变化结果表明，乳酸脱氢酶、乙醇脱氢酶、木糖还原 酶和木糖醇脱氢酶为米根霉菌株利用葡萄糖、木糖共发酵产L．乳酸的关键酶。 突变株N50．7的乳酸脱氢酶、木糖还原酶和木糖醇脱氢酶的比活力均高于原始 菌株，而乙醇脱氢酶的比活力低于原始菌株。对高产突变株和原始菌株的蛋白 点进行双向电泳匹配，获得了22个差异蛋白点。 5)选择Logistic和Luedeking．Piret非线性模型对高产突变株发酵产L一乳酸 过程中的菌体生长及产物生成进行动力学分析，运用Matlab软件对试验数据进 行拟合，建立起动力学模型。 菌体生长动力学模型：a巩x=o．1632(1一石X嚣)x III 产物生成动力学模型：d班P=14．2143 产物生成动力学模型：d班P=14．2143 d俄X+O．1153X 经验证试验表明，模型能够较好地反映L．乳酸产生菌生长及产物合成的动 力学行为。 关键词：L．乳酸；木糖；米根霉；离子注入；动力学 IV Study Study on Pro duction of L-Lactic Acid through C O．Fermentatio n of Pentose and H eXOSe by Rhizopus Oryzae ABSTRACT Lactic acid is one of the most potential organic acids in the 2 1 3‘century， especially L-lactic aid，whose unique configuration shows a much extensive applicati