洛克沙胂对小鼠DNA损伤及VEGF和CD34表达的初步分析-基础兽医学专业毕业论文.docxVIP

摘 摘 要 摘 要 砷是一种公认的致癌物，可导致皮肤癌、肺癌、膀胱癌等。洛克沙胂虽然毒 性较小，但其对细胞DNA损伤作用显著，进入环境后对生物造成潜在的遗传毒 性。本试验通过单细胞凝胶电泳技术，研究洛克沙胂对小鼠肝脏和肺脏细胞的 DNA影响，初步探讨洛克沙肿作为饲料添加剂对环境生物造成的潜在风险。 单细胞凝胶电泳实验中，试验设计为空白对照组、低剂量组(1／IOLD50)、 中剂量组(1／5LD50)、高剂量组(1／2LD50)，洛克沙胂染毒小鼠，染毒时间为 1、2、4、6、8d，后处死小鼠，取肝脏、肺脏，制成单细胞悬液，细胞密度调整 在106～10 7个／ml。用改良碱性单细胞凝胶电泳方法，通过CASP软件分析彗星尾 部DNA含量、尾矩、Olive尾力矩三个指标。结果表明，小鼠在1／2LD50、 1／5LD50剂量组中均表现出明显的DNA损伤，与空白对照组相比有显著性差异 (尸0．05)，在设定剂量范围内呈现一定的剂量．效应关系和时间．效应关系；同 时，小鼠在1／10LD50剂量组中也表现出细胞DNA损伤，与空白对照组相比差异 显著(P0。05)。试验结果表明，洛克沙胂可致小鼠肝脏、肺脏细胞DNA明显 的断裂和迁移，对细胞DNA造成损伤，各染毒组与空白对照组有显著差异。 免疫组化对洛克沙胂诱导的小鼠肝脏、肾脏组织中VEGF和CD34的表达有 较好的定位，VEGF和CD34在1／2LD50剂量组中表达明显，VEGF以胞质中呈棕 黄色染色为阳性，CD34在血管内皮胞质或细胞膜有阳性表达。在1／5LDso、 1／I OLD50剂量组未检测出阳性表达。 单细胞凝胶电泳实验及免疫组化均表明洛克沙胂对小鼠细胞有DNA损伤作 用，且单细胞凝胶电泳能够检测出早期细胞损伤。单细胞凝胶电泳技术可作为砷 化合物DNA损伤的有效检测手段。 关键词：洛克沙胂；单细胞凝胶电泳；DNA损伤；免疫组化；VEGF；CD34 ABSTRACTABSTRACT ABSTRACT ABSTRACT Arsenic compound is a classical carcinogens，which has DNA damage effect on organism．Roxarsone not only has significantly effect on the DNA damage，but also has potential genetic toxicity to organism in the environment although the toxicity of roxarsone is lower than inorganic arsenic．In this paper，single-cell gel electrophoresis Was used to demonstrate the roxarsone’S side—effect on mice liver and lung cells DNA， and may lay basic foundation of the roxarsone to the genetoxicity research and risk evaluation to organism in the environment． The ICR mice were exposed to different concentration of roxarsone(1／2LD50， 1／5LDs0，1／1 0LDs0，and control group)，which were exposure time to 1，2，4，6，8d respectively．Then，the mice were sacrificed after 1，2，4，6，8d，the liver and lung of mice were made into single cell suspension，cell density was adjusted in the 1 00～1 07／m1． Based on the modified alkaline single-cell gel electrophoresis，the content of tail DNA， tail moment and olive tail moment were measured by the CASP soRware．The results showed that the liver and lung cells of mice were exposed to the dose of 1／2LDso， 1／5LDs0，which could induced DNA damage．