罗格列酮对2型糖尿病小鼠肌肉萎缩拮抗机制-公共卫生专业毕业论文.docxVIP

中文摘要罗格列酮对2型糖尿病小鼠肌肉萎缩拮抗机制 中文摘要 罗格列酮对2型糖尿病小鼠肌肉萎缩拮抗机制 研究生：胡君平 导师：裴迎新教授郑丽教授 郑州大学，公共卫生学院，食品与营养卫生教研室，郑州，450053 中文摘要 目的 了解单纯性2型糖尿病(胰岛素抵抗)是否会出现肌肉萎缩，探讨导致2 型糖尿病肌肉萎缩的机制。 方法 1．动物 采用2型糖尿病基因模型小鼠(BKS．Cg-m+／+Lepr如)作为实验组，同 窝出生的野生型小鼠为对照组(C57BLKS／Jm+／m+)，每组12只雄性小鼠， 均为出生四周，实验组和对照组小鼠均购自Jackson Laboratories(Bar Harbor，ME USA)。对四周大小的实验组和对照组小鼠进行称重，然后均以12h亮、12h暗 的周期饲养。在另一组试验中，一组对照组和实验组均饲以标准饲料，另一组在 对照组和实验组饲料中均加入马来酸罗格列酮饲养(8mg／kg／d)。 2．在第9周时再对两组小鼠进行称重、测量身长，并采用从心脏采血的方 法采集血样，分别测定实验组和对照组小鼠的血浆胰岛素和血糖。之后将实验组 和对照组小鼠麻醉，取比目鱼肌、伸趾长肌、跖肌和心肌进行称重，并分别测定 两组小鼠肌肉蛋白质降解速率、肌动蛋白降解片段、肌纤维横断面面积以及蛋白 酶体活性。 3．细胞培养 将小鼠3T3．L1前脂肪细胞3-10代的细胞置37C、5％C02的培养箱中培养， 期间依次采用标准DMEM(Invitrogen，Carlsbad，CA)培养基，含10％d、牛血清 中文摘要(HyClone，Logan，UT)、青霉素(200 中文摘要 (HyClone，Logan，UT)、青霉素(200 U／m1)和链霉素(200pg／m1)，培养2天； 依次放在含llaM地塞米松，lOlXg／ml胰岛素和0．5mM 3一异丁基一卜甲基黄嘌呤 (Sigma-Aldrich)的诱导分化细胞培养基中培养2天；放在含10％胰岛素的分化后 培养基中生长5天，这时细胞形态上呈现高分化型。之后，细胞再次于DMEM 培养基中继续培养2天。接下来，将细胞放在含lOpg／ml罗格列酮(Cayman Chemical．AnnArbor,MI)培养基中培养16小时，然后收集细胞，检测各项指标， 包括：脂联素mRNA、肿瘤坏死因子a(TNF．a)和白介素6(IL．6)的mRNA表达 水平。 4．Real．time PCR 用TrizolRNA提取试剂(IllVi仃09％)从对照组和实验组小鼠腓肠肌和不同分 化形态的3T3-L1小鼠细胞提取RNA，进行反转录后。Real—time PCR用SYBR Green PCR试齐U(Bio．Rad，Hercules，CA)、the Opticon DNA仪器(Bio—Rad)和下面的循环 参数：94℃2分钟，94℃15秒40个循环，55℃30秒，72℃30秒，最后72℃ 10分钟。加入引物小鼠泛素连接酶、MuRF-1、甘油醛一3磷酸脱氢酶进行扩增， 测定GAPDH基因和检出值mRNA的表达之间的差异。 5．统计分析 采用SPSSl7．0软件进行统计学分析，服从正态分布的数据以均数±标准差 (x蛔)表示，不同处理组间均数的比较采用单因素方差分析(ANOVA)，两组之 间比较用t检验，以P0．05作为有统计学意义的判断标准。 结果 1．在实验第4周时实验组小鼠体重与对照组小鼠体重没有明显差别(刀 =12．t=1．263，P0．05)；但在第9周时实验组小鼠体重、血糖、血浆胰岛素水 平与对照组小鼠比较均有明显增加且差别具有统计学意义(分别为t=20．320，P 0．0001；t=14．294,P0．001；t--31．004，P0．0001)。二者之间BMI差异有 显著性(f--5．362,P0．001)。 2．在第9周时实验组小鼠比目鱼肌、伸趾长肌、跖肌肌肉重量与对照组相 比均有明显下降且差异具有显著性意义(以=9，t=2．961，P0．05)。 3．实验组小鼠腓肠肌肌纤维横切面面积显著小于对照组且差异具有显著性 意义(以=9，t=33．732，P0．001)。 4．实验组小鼠腓肠肌14．Kda的肌动蛋白片段密度显著高于对照组(以=9，t =3．013。P0．05)。 中文摘要5．实验组小鼠比目鱼肌、伸趾长肌、跖肌的蛋白质降解速率显著高于对照组 中文摘要 5．实验组小鼠比目鱼肌、伸趾长肌、跖肌的蛋白质降解速率显著高于对照组 (刀=9，t=3．743尸0．05)。 6．实验组小鼠腓肠肌中的蛋白体酶活性显著高于对照组(刀=6，t=4．521，P 0．05)。 7．2型糖尿小鼠磷脂酰肌醇一3激酶(P13 Kinase)活性显著降低(咒=9，t -2．916尸0．05)，同时胰岛素受体1磷酸化丝氨酸307